TGFβ1基因转染大鼠树突状细胞增强移植心脏耐受性及其相关趋化因子表达分析.pdfVIP

中文摘要 中文摘要 目的： 1．建立从大鼠骨髓前体细胞分离、培养和扩增树突状细胞(dendriticcell，DC)的 marrowderived 方法；研究影响骨髓DC(bone DC，BM—DC)分化、成熟的 相关因素以及不同分化时期DC的免疫免疫生物特性。 成熟分化以及免疫功能的影响。 3．观察TGFBI．DC在受者大鼠体内迁移归巢途径及微嵌合水平，检测受者次级 telomerasereverse 淋巴器官T细胞凋亡和端粒酶逆转录酶(human transcriptase hTERT)表达的变化。 4．探讨TGFBl。DC对移植心脏的急性排斥反应发生时间、排斥反应级别以及存 活时间的影响；并进一步研究TGFDI．DC输注对移植受者体内多种相关趋化 因子及其受体表达的影响。 方法： blot 等)及免疫学技术研究TGFpI基因转染对于DC发育分化、分子表型以及免疫 大鼠后，以免疫组织化学检测TGFBI．Dc的迁移路线和分布特征，TUNEL检测 受者脾T细胞凋亡以及端粒酶逆转录酶hTERT的表达。按Ono’s方法建立大鼠 同种异体心脏移植模型，观察TGFBI—DC输注对于移植心脏排斥反应出现时间、 反应级别以及存活时间的影响，以免疫组织化学方法观察移植后相关趋化因子的 表达和变化。 结果： 中文摘要 察到有大小不等的集落生成，吞饮和吞噬能力较强，MLR实验中不能刺 激T细胞增殖。培养至第10天，集落减小并减少，多数细胞从集落中 释放，散在悬浮细胞增多。细胞多具有较长的树枝状突起，细胞吞饮吞 噬能力减低，MHCII类分子和B7—2分子表达增高，刺激T细胞能力增 强。应用rrIL一4可提高细胞得率，每只大鼠二后肢骨髓前体细胞经过扩 增可得到8-20x106个细胞。 2、一定浓度的rhTGFfII对DC的扩增和分化具有抑制作用，细胞集落较少， 细胞成熟缓慢，大多数细胞无突起或突起较短。MHCII类分子和B7．2 分子表达较低，刺激T细胞增殖能力低下，但加入LPS刺激后MLR刺 激指数与IL-4对照组细胞无明显差异，细胞得率略低。 3、通过酶切后连接、质粒转化、扩增与抽提，构建得到TGF[jI重组真核表 构建正确。 4、以Westernblot、R■PCR、免疫细胞化学以及免疫荧光染色显示脂质体 蛋白表达，经测定转染效率可达到18～23％。 5、应用FACS和免疫细胞化学等方法检测发现，转染TGFpI基因得到的 因转染对DC生长无明显抑制作用。 6、转染后各组DC输注Lewis大鼠发现，各组DC主要归巢到受者大鼠的 次级淋巴器官胸腺依赖区，其中尤其以TGFpI．DC组在输注后第7～14 天时在脾的动脉周围淋巴鞘和边缘区数量最多。 巴鞘等处的T细胞凋亡水平明显高于对照组，并且发现该组的T细胞 hTERT表达水平明显低于对照组。 TGFDI．DC组排斥反应发生时间延迟，排斥反应级别明显降低，移植心 中文摘要 脏存活时间显著延长，最长可达51天，平均存活时间达到33．14-+7．88 天，与其它组相比具有显著差异(p0．01) 9、研究各组移植心脏、受者脾和淋巴结等器官趋化因子RANTES、MCP-1、 了以上趋化因子的表达，改变其表达模式，提示TGFpl下调相关趋化因 子表达可能是TGFBl．DC增强移植心脏耐受性的机制之一。 结论： T细胞能力，该效应可被LPS所逆转。 子表型、分化程度均显示TGF[11-DC为imDC。 3、TGFpl—DC术前输注受者大鼠可延迟移植心脏排斥反应发生时间，降低 排