丙型肝炎病毒感染自然转归分子机制的研究.pdf

20 ㈣Y1m9㈣9籼7帆3㈣8 丙型肝炎病毒感染自然转归分子机制研究 博士研究生：李婷婷 指导教师：黎诚耀 摘 要 Cvirus，HCV)感染而引起的严重威 丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(Hepatitis 胁人类健康的传染病。尽管国际上在慢性丙肝防治理论与方法上取得了长足进 展，但对HCV发生发展的分子机制了解得并不透彻，特别是针对中国人群的 HCV感染自然康复的分子机制仍不清楚。另一方面，缺乏理想的HCV感染动物 模型，特别是小型灵长类动物感染模型，从机制与技术上阻碍了HCV疫苗免疫 与抗病毒药物研究。 本课题第一部分针对中国献血者人群HCV感染自然康复的分子机制这一科 学问题开展了研究。HCV感染可分为自然康复性感染者和慢性感染者两个人群。 HCV感染转归及其临床表现与宿主和病毒的自然属性以及相互作用有关。目前 认为，宿主方面发挥作用的因素可能包括免疫应答和遗传因素，病毒方面的因 素包括遗传异质性、病毒载量及病毒基因型等。因此，从宿主和病毒两方面来 了解HCV自然康复和慢性感染者问的差别，对于揭示HCV自然康复及慢性感 染转归的分子机制，最终控制HCV感染具有重要指导意义。 在这部分内容中，我们对来源于我国广东和北京地区献血者中的HCV感染 者进行研究，测定HCV感染的自然康复比率与基因型分布，探索HCV自然康 复及慢性感染的分子机制。对广东和北京献血者中HCV抗体初筛阳性的血清样 品采用两种EIA方法进行抗体再测定，以定量PCR方法测定病毒载量，并采用 巢式PCR对核酸进行确认，进而将样本分为三种HCV感染状态，即自然康复性 RNA阳性样品通过分析5-NCR序列 定血清样品中IFN吨和IFN吖含量。HCV 中文摘要 进行基因分型。结果，160份初筛HCV抗体阳性的样品中，自然康复性样品45 量PCR阳性样品病毒载量范围从59．8IU／ml到2．43x106IU／ml(中位值3．67x104 基因3型和23．8％基因6型。l型为主要基因型，6型主要分布在广东样品中。 通过对自然康复性、慢性、假阳性献血者的临床信息(性别、年龄)、HCV抗 体水平、血清中IFN含量与HCV基因型进行分析发现，三组HCV感染状态献 于慢性感染和假阳性组(30和28岁)，IFN．a含量的中位数略高于其它两组(虽 水平(S／CO值)的中位数高于自然康复性和假阳性组，而其IFN．口与IFN—y比 值(IFN．嘶ratio)的中位数低于自然康复性感染和假阳性组。在慢性感染人群 体水平的中位数高于其它基因型(多重比较萨O．028)。结论：通过比较中国北 京及广东地区献血者自然康复性、慢性、假阳性HCV感染问的一系统参数，发 感染病毒载量的控制上发挥作用。IFN．嘶比值在慢性感染中与病毒载量呈正相 关，它可能作为一个新的测定指标用于评价HCV感染的远期结果。 本课题第二部分针对HCV感染尚无理想的小型灵长类动物模型这一科学难 题，建立HCV动物感染模型探索HCV感染自然转归的分子机制。GB病毒B (GBV．B)是一种最接近HCV的病毒，同属黄病毒科肝病毒属。与HCV不同， GBV．B可以感染狨猴(common 或慢性肝炎，因此是一个有价值的模拟HCV感染的替代病毒。但是GBV—B仍 然与HCV存在着差异，不能完全模拟丙型肝炎病毒在体内的感染与免疫状态。 n 博士学位论文 因此，以GBV．B基因组为骨架，以来源于献血者人群中一例HCVlb基因型样 的狨猴感染模型，探索含HCV完整功能蛋白的嵌合病毒感染自然转归机制，可 为HCV免疫防制与抗病毒药物研究提供有效实验动物感染模型技术平台。 毒的原代狨猴血清，建立HCV／GBV．B嵌合病毒狨猴感染模型。接种病毒后连续 监测29．37周，每周股静脉采