广州管圆线虫感染免疫中ICOS-ICOSL通路及发育期蛋白的分析和研究.pdfVIP

3 广州管圆线虫感染免疫中ICOS-ICOSL通路及发育期蛋白的分析和研究 中文摘要 中文摘要 研究背景：广州管圆线虫是一种人兽共患寄生虫。其幼虫阶段可侵入非正常 宿主——人，引起中枢神经系统的病变。 在感染免疫中抗原由抗原提呈细胞(APC)处理成多肽，它与MHC结合并移至 APC表面，产生活化TCR信号；而APC或靶细胞表面的共刺激分子与T淋巴细胞表 面的有关受体结合就产生第二活化信号，即协同刺激信号。在双信号刺激下，T淋 巴细胞被激活后转化为淋巴母细胞，并迅速增殖、分化。CD28-B7共刺激途径是研 究最早最深入的共刺激途径之一, 但CD28并不是惟一的共刺激分子。可诱导共刺 激因子（inducible co-stimulator, ICOS ）为CD28家族的新成员，主要表达于活化的 Ｔ 细胞；其配体ICOSL主要表达于B细胞、 单核细胞、 树突状细胞和T细胞。 此外，寄生虫需要通过改变宿主来完成其生活史，因此，他们有根据宿主环 境来调节基因的差异表达的能力。广州管圆线虫生活史的完成需要几个不同的宿 主。Ⅲ期幼虫 （L3 ）感染大鼠后，穿过血脑屏障发展成Ⅴ期幼虫 （L5 ），再移行至 心、肺部血管内发育成成虫。 本研究首先应用ICOSL-KO和C57BL/6J两种小鼠建立广州管圆线虫感染的模 型，观察ICOS-ICOSL信号通路在广州管圆线虫感染免疫调节中的意义；其次，运 用双向荧光差异凝胶电泳和质谱相结合的蛋白质组学技术分析鉴定广州管圆线虫 发育期特异性蛋白质并分析他们在宿主-寄生虫相互作用中的意义。本研究结果可 为广州管圆线虫感染的发展和消退研究提供新的思路，还为广州管圆线虫病的治 疗提供可能性靶标。 第一部分 ICOS-ICOSL 信号通路在广州管圆线虫感 染免疫调节中的意义 目的：通过观察两种广州管圆线虫感染宿主模型（ICOSL-KO和C57BL/6J ）血 清抗体、脾淋巴细胞表面协同刺激因子及脾淋巴细胞分泌细胞因子的动态变化， I 中文摘要 广州管圆线虫感染免疫中ICOS-ICOSL通路及发育期蛋白的分析和研究 探索ICOS-ICOSL信号在广州管圆线虫感染免疫调节中的意义。 方法：实验室条件下构建广州管圆线虫感染的ICOSL-KO和C57BL/6J小鼠模 型。分别于感染前、感染后1周、2周、3周、4周，分批处死小鼠每批每组各取5只 小鼠，眼眶取血，收集血清，ELISA法测定血清中IgG 、IgG1和IgG2a 的水平。同 时分离不同感染时期小鼠脾淋巴细胞悬液，流式细胞仪测定CD4+T淋巴细胞上 CD28、CD154和ICOS 的表达，其结果用SPSS17.0采用t检验和F检验分析其统计学 意义。体外培养脾CD4+T淋巴细胞。加入广州管圆线虫L5可溶性抗原干预共刺激 信号。培养72小时后，收集细胞上清。ELISA法测定上清中IFN-γ 、IL-12、IL-4 、 IL-5和IL-13等细胞因子表达水平。 结果：ICOSL-KO组与C57BL/6J组在感染后均表现为IgG抗体水平的升高；前 者IgG1水平在感染后升高不显著，但后者的IgG1水平相对在感染后3W开始出现升 高，4W时仍维持升高； 同时C57BL/6J小鼠的IgG2a水平在感染后升高不显著，并 于3W开始出现下降，反观ICOSL-KO小鼠IgG2a水平在感染后3W开始出现升高， 4W时仍保持升高状态。ICOSL-KO组与C57BL/6J组相比IgG1动态趋势及IgG2a水平 升高趋势，显示ICOS-ICOSL信号通路的阻断通过抑制Th2 的极化使宿主无法组织 产生有效的体液保护性免疫，ICOSL-KO小鼠表现为Th1 的的免疫类型占优势。感 染后ICOSL-KO组的CD4+T淋巴细胞上协同刺激分子产生也明显滞后，感染后3W 才出现显著性差异；C57BL/6组针对广州管圆线虫急性感染，感染后1W 即出现显 著性差异。C57BL/6J组感染早期出现IFN-γ 、IL-12增高现象，而后下降，提示感染 2W 内Th1免疫