甜高粱遗传背景对其再生能力的影响及再生体系的建立.pdfVIP

摘 要 摘 要 高粱是全球仅次于小麦、水稻、玉米、大豆、马铃薯的第六大重要作物，是 粮食、饲料和酿酒业原料的重要来源，尤其对亚洲和非洲干旱区的发展中国家起 着重要作用。甜高粱是高粱的一个变种，因其茎杆的含糖量高而得名。利用转基 因技术改良甜高粱品种已引起广泛关注。而植物转基因技术通常依赖于植物快 捷、高频再生体系的建立。高粱是目前公认的较难进行遗传转化的作物之一。由 于高频再生和高效的转化体系较难建立，因此其遗传转化工作进展很慢。而一个 高效率的再生体系的建立是遗传转化体系的关键之一。 本文以测序高粱BTx623 和M-81E、原甜、考利、意大利、凯勒等几个不同 起源的甜高粱品种为材料，对其遗传背景进行分析，探讨不同基因型的再生效率。 然后再挑选5 个甜高粱品种，探索其再生体系的建立。得到如下结果： （1）用10 个SSR 和 18 个STS 分子标记对BT×623 、Ji2731 、意大利、凯 勒、M-81E 、原甜、俄甜、丽欧和考利、雷伊10 个品种的的遗传差异进行比较， 统计分析发现意大利与雷伊，丽欧亲缘关系较近。M-81E 、考利、俄甜亲缘关系 较近，原甜，凯勒关系较远。所以挑选意大利、M-81E 、考利、凯勒、原甜5 个 基因型，探讨甜高粱基因型与愈伤组织诱导的差异。 （2 ）以萌发的成熟种子为外植体，探索不同基因型愈伤组织诱导再生的能 力。结果表明，凯勒与意大利的愈伤组织诱导率较低，且愈伤组织不易分化。 M-81E 则易于愈伤组织的诱导，且愈伤组织可以分化成苗。 （3 ）分别以M-81E 的种子、幼胚、幼穗为外植体，并设计正交实验对萌发 种子的愈伤组织诱导和胚性愈伤组织的形成进行优化，在 MS 培养基上添加 4 –1 –1 –1 –1 mg l 2, 4-D, 0.2 mg l KT,45 g l 蔗糖 和1.2 g l 琼脂，得到了胚性愈伤高达 74% 的愈伤诱导培养基。并且优化了愈伤组织分化培养基，在愈伤组织分化培养 基R2 上分化效率达到了38% 。以未成熟胚为外植体，在幼胚愈伤组织诱导培养 基上诱愈率可以达到 90%，其中胚性愈伤的诱导率达到 73% ，在幼胚愈伤组织 分化培养基上，其再生效率可以达到50%；以幼穗为外植体，利用不同配方的植 物激素对其愈伤组织诱导发现在幼穗诱导愈伤组织培养基Y3 上，其愈伤组织诱 导率最高的为71% ，愈伤分化效率最高达到了92% 。 我们的结果表明：不同基因型的甜高粱愈伤组织的诱导效率是不同的，愈伤 组织的再生能力也不同。以同一品种的不同来源的组织，愈伤组织的诱导效率与 分化效率都是不一样的，其中幼穗的分化效率最高，可以作为遗传转化的材料。 但是因其材料取材的限制，可以参考成熟种子和幼胚作为外植体，进行遗传转化。 Ⅰ 摘 要 关键词：甜高粱 分子标记 遗传多样性 基因型 外植体 组织培养 愈伤诱 导 植株再生 II ABSTRACT ABSTRACT Sweet sorghum (Sorghum bicolor L. Moench) is a variety of grain sorghum. Apart from being used as food, feed, fiber, it is also an excellent source of ethanol-based biofuels because of its high content