新型信号放大型DNA分子机器应用.pdf

新型信号放大型DNA分子机器的研究及应用 摘要 随着分子生物学的发展，围绕DNA这一生命遗传物质的研究成为了生命科学 和材料科学研究的热点之一。本文将纳米技术和DNA分子机器技术相结合，探索 高灵敏度生物分析新方法。结果表明，所建立的检测方法灵敏度高，易制作、简 便，在生物分析中将具有广阔的应用前景。 本文主要开展了以下几个方面的工作： 一、高灵敏的基于一对一识别靶DNA的三胶体金／硫化铜纳米粒子探针的电化 学DNA传感器 设计了一对一识别靶DNA的三胶体金／硫化铜纳米粒子探针，并构建了高 灵敏的电化学DNA传感器。该三胶体金／硫化铜纳米粒子探针是采用两条中间 部分杂交互补DNA链形成桥型DNA骨架结构，将修饰了DNA的纳米金与桥 型DNA骨架结构杂交，形成三端含有纳米金而一端留有靶DNA识别序列的探 针结构，然后在纳米金上通过DNA连接大量的硫化铜纳米粒子标记物。利用 该探针构建了基于夹心式杂交识别的电化学DNA传感器，即首先将捕获DNA 固定于磁珠上，靶DNA的一端可与捕获DNA杂交进而连接到磁珠上，另一端 与三胶体金／硫化铜纳米粒子探针杂交，形成夹心式结构。用硝酸溶液溶解探针 测。该电化学DNA传感器的优点：探针的一对一识别提高灵敏度，每个探针 上有三个金纳米粒子，可以使信号放大，检测中Cu2+预富集再此放大响应信号。 mol／L一1×10-12 在优化的实验条件下，检测靶DNA的线性范围是1×10_14 于此探针的生物传感器选择性好。基于纳米技术的DNA探针具有很好生物相 容性，并且灵敏度和选择性非常好，在未来的分析研究中将会有很好的应用。 二、自动的指数倍放大DNA的DNA分子机器及其在三磷酸腺苷电化学分析中 的应用 构建了一种新的可自动运行的信号放大型DNA分子机器，可完成DNA的 指数倍放大。它是利用大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow大片段的聚合作用驱 动反应进行，实现信号转换，并输出指数倍放大的DNA。再用夹心法捕获这些 DNA，并与DNA桥接金纳米粒子负载CuS纳米粒子的多极放大探针杂交，将 输出的DNA转换为电化学信号，用灵敏的DPASV进行检测。该DNA分子机’ 器操作lh，可使检测DNA的灵敏度增加两个数量级，在优化的实验条件下， moFL，检测限可达2．8 检测靶DNA的线性范围是1．0×10～6mol／L—1．0×10-14 x10J7 mol／L(3s)，放大效率更高。同时，以磁珠为DNA的固相载体，便于循 环反应的控制，同时实现了信号DNA从DNA分子机器本体的输出。此外，将 适体识别元件与DNA分子机器相结合，以三磷酸腺苷(ATP)为模板分子，考 察了这种新型DNA分子机器的性能，并实现了癌细胞中ATP的检测。在优化 moFL一2．0×l旷mol／L，检测 的实验条件下检测ATP的线性范围是2．0×10-8 mol／L(3s)。总之，这种新型DNA机器结构简单，可自动化运 限为4．7×10。9 行且信号放大效率高。通过改变DNA序列，更可应用到多种适体小分子的检 测中，具有潜在的应用价值。 三、DNA分子机器双循环放大检测DNA 构建了一种通过双循环放大检测目标DNA的DNA分子机器。双循环工作模式 包含链断裂自循环模式和链断裂交叉循环模式，这两种循环模式均通过两种不同 的内切酶协同来完成。采用生物条码的CdS纳米粒子—DNA探针组装到DNA分子 机器系统来寻踪目标DNA。当目标DNA进入到系统中，DNA机器就会被触发， 然后自主的进行双循环工作模式来产生信号，整个过程可以根据需要来很好的控 制。信号的检出是通过在酸性溶液中溶解CdS纳米粒子—DNA探针，然后使用 度的对应电信号，从而达到检测目的。在优化的实验条件下，检测靶DNA的线性 7 mol／L一8．0×10-14 x10‘1mol／L(3s)。因此， 范围是1．0×10-16 moVL，检测限为4．1 该DNA分子机器能够显