低能离子束入松科花粉的细胞学效应研究.pdf

低能离子柬注入松科花粉的细胞学效应研究 摘要 离子束生物工程学作为一门新兴的交叉学科，目前仍然有技术问题值得进一 步研究，特别是关于低能离子束注入后对植物细胞的直接损伤效应方面的知识还 很缺乏。在离子注入试验中植物的休眠种子是最常用的试验材料。许多研究报道 描述了受处理种子萌发以后，如幼苗或成长的植物体上的生物学效应，其研究结 果也只是在个体水平描述离子束诱发的生物学效应；很多研究采用裸露的生物有 机分子作为注入对象研究离子束对生物分子的直接作用，但以生物大分子系统模 拟实验的结果只能对离子束的作用机制进行推测性解释，不能用于说明生活的细 胞中的变化。细胞是生物体的结构和功能单位。离子束作用于生物体的有效部位 也是细胞。细胞学效应是辐射生物学效应中最显著的效应之一。因此，只有在细 胞水平探索离子束与细胞的直接相互作用，深入研究离子束对细胞的“加工”效 应，才能在真正意义上揭示离子束生物学效应机理。 要阐明低能离予束的细胞学效应机制，需要找到一个良好的实验模式系统。 花粉接近单细胞，结构相对简单，可以离体培养，且可以在短时间内完成观测， 是研究辐射生物学效应机理较理想的实验系统。由于裸子植物花粉具有生命力 强、耐贮藏和花粉量大等优点，本研究选择裸子植物黑松(Pinus拍unbergii Parl．)和雪松[Cedrus 膜、细胞骨架系统、细胞核和蛋白质组等几个结构层次研究低能离子柬注入对细 胞的直接损伤效应。本项研究所获得的研究结果主要包括如下6个方面。 1．应用生物显微镜技术，观察了低能离子注入对花粉萌发和花粉管生长的 影响。对花粉萌发和花粉管生长有显著影响的起始剂量是3×10”ions／cm2。 剂量为3~5×10“ions／cm2的N离子注入显著促进雪松花粉的萌发，其剂量一 效应曲线呈先升后降；而离子注入总体上抑制黑松花粉的萌发，其剂量一效应曲 线呈“马鞍型”，“鞍点”出现在7×10“ions／cm2。从花粉管生长速率和花粉 管畸形情况看，离子注入对雪松和黑松花粉管的损伤效应很相似。总体上，离子 注入抑制花粉管的生长，并引起花粉管发生畸形，畸形花粉管的主要类型是花粉 管变宽和(或)花粉管顶端肿胀。通过低能离子、紫外线和伽马射线辐照花粉的 比较研究，认为不同辐照源对花粉有不同的损伤机制。 2．首次应用原子力显微镜，结合普通光学显微镜、扫描电子显微镜从不同 的尺度水平研究了低能离子注入对雪松花粉外壁结构的影响。普通光学显微镜观 x10“ions／cm2时，花粉着色与对照有显著的差异，表现 察表明，注入剂量／7 在花粉表面呈锈色；原子力显微镜和扫描电子显微镜图像显示低能离子注入对雪 松花粉壁有刻蚀作用，主要表现在花粉外壁结构单位被削去；刻蚀程度与注入剂 10”ions／cm2开始对花粉外壁有刻蚀作用，剂量／5 量里正相关，注入剂量3x x10”ions／cm2时，花粉壁表面开始出现“孔”、“洞”结构，甚至出现较大的裂 痕或“沟”。这些研究结果为离子束介导外源基因进入受体的遗传转化技术提供 了实验证据。 3．为探讨离子注入损伤细胞的生理机制，以黑松花粉为材料，研究低能离 子注入处理后花粉内超氧阴离子自由基(05一)产生速率、丙二醛(MDA)含量、细 胞膜相对透性(伤害度)和抗氧化酶SOD、POD、CAT活性动态变化。研究结果表 显著提高，使膜脂过氧化作用增强，导致膜系统损伤，花粉MDA含量显著提高， X 细胞膜相对透性增大，三个指标之间呈正相关；在低注入剂量1 10”ions／cm2 下，花粉超氧化物歧化酶(SOD)活性提高，但随着注入剂量的增加，SOD活性 逐渐降低；而过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)活性随着注入剂量的增 加而下降。由此推测，在黑松花粉中抵御离子注入所产生的自由基的抗氧化酶类 可能是超氧化物歧化酶(SOD)。 4．为从蛋白质分子水平揭示低能离子注入对细胞的损伤效应，应用 SDS—PAGE电泳技术和PAGE电泳技术分析了低能离子注入黑松花粉后花粉管内蛋 白质组成及SOD同工酶、POD同工酶谱带的变化。研究结果表明，离子注入可引 起细胞内蛋白质组成和同工酶谱发生改变，这说明离子注入后可以使花粉粒内的 遗传物质表达发生了一定的变化。 5．细胞骨架与细胞功能的密切相关。正