GDNF对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用时间窗与作用机制探讨.pdf

中文摘要 前 畜 i遂年来，缺点熬脑盛篱病的磅究取褥羹大进晨，联合药物试验 的时代正在快速来临，针对缺血性脑损伤的血管和细胞的两种机 制鼹联合疗法很霹黥会对卒中的预螽产生很大影响。摹期溶猹是 针对血管的一种治疗方法，至1996年nPA的应用获美国FDA认 可以来，溶拴治疗一度成为研究的热点，随着缺m性脑梗死溶栓治 疗的开装，盘循环耋建后的再灌注损伤g益受到篷视，动物实验证 实，针对细胞的神经保护治疗可以延长成功再灌注的时间窗，丽再 灌注损伤一旦发生，摔经保护治疗更是治疗策略的蓄遗，它在分子 水平上佟用予缺血损伤级联反应的不圊环节，阻艇缺血租再灌注 损伤后细胞坏死的不同机制。胶质细胞源性神经营养因子(GD— NF)终为～静多效煞豹季孛经营葬鬻子，不仅可蹋予治疗神经系统 变陛痰瘸，丽且对缺血性拇经党损伤也有保护作用。7本文首次探 讨GDNF对藏缺盘褥灌注摸魏保护份用斡时闽窑及冀佟蹋机翩， 以便为临床提供一静新的神经细胞保护刻及其应用时闽窗。 ， {实验材精与方法 1。实验动物与分组：38只大鬣随视分为二大组：脑梗张体积 缀《V)及免疫缀他缝(1)。翦者分为生理盐水缀(N，组n=5)+ rt= 3)，生理盐水组(N；搬=5)，GDNF组按绘骛对斌不同分为再灌注 0h组(Gl。rl=5)、3h经(G船11=5)。 2．实验器材与试剂： SN一2型脑立体定位仪(上海)； Metamorph显微图像分析系统(日本)； ． GDNF(深圳晶美公司)； Caspase一3及TNF一口多克隆抗体(武汉博士得公司)。 3．局灶脑缺血模型及给药方法：根据Zea Longa线栓法制备 右侧大脑中动脉闭塞模型，所有大鼠均采用脑表面给药法。 4．观察指标及测定方法：TIC染色测定缺血24h梗死灶体 积；HE染色观察梗死区域细胞形态的变化；免疫组化染色观察缺 血12h缺血半暗带Caspase3及TNFct蛋白表达。 实验结果 1．光镜下组织学改变 治疗组HE染色显示额顶叶皮质缺血性改变轻于对照组。 2．对照组与给药组脑梗死体积比较 与N，组比较，G砷组脑梗死体积明显减小(P0．01)；G。。组脑 梗死体积轻度减小(P0．05)；G。。组脑梗死体积减小不显著(P 0．05)。 3．对照组与给药组层梗死面积比较 在0h及1h给药组，第2、3、4层的梗死面积小于N，组(P0． 05)，3h给药组各层梗死面积与N，组比较差异不显著(P0． 05)。 4各组脑组织Caspase一3、TNF—a免疫组化染色灰度值的比 较 假手术组脑内未见Caspase一3、TNF—o【蛋白的表达。N。组 于缺血侧额顶叶皮质可见较多表达Caspase一3、TNF一仪的阳性 ·2· 一部位TNF一位的表达差异不显著(PO．05)。 讨 论 脑缺血再灌注中发现，再灌注阶段的损伤占整个损伤的70％ 以上，缺血半暗带是再灌注损伤的主要部位，同时也是神经保护剂 干预的主要部位，在急性缺血性卒中治疗上具有重要意义。根据 以往的研究结果，局灶性脑缺血模型的额顶叶皮质可作为缺血半 暗带的组织学等值区。 现认为，缺血再灌后神经细胞损伤来自二个方面，一是细胞凋 亡，二是炎症反应。针对这两方面的病理生理机制，曾进行诸多神 经保护药物的开发与试验，但至今尚未发现肯定有效的神经保护 药物供临床使用。近来，神经营养因子以其多方面对抗缺血性脑 损伤并促进损伤后神经元的修复而备受关注。 胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)是1993年发现的一个 新的神经营养因子，通过与它的两个受体Ret、GFR一0c一1结合而 发挥作用，本文首先探讨GDNF对脑缺血再灌注损伤保护作用的 时间窗，由于不同的脑组织和脑细胞对