多重耐药铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌耐药基因的研究.pdf

鼍 lItll11 111 11 II IIII IIUl ＼1 目 录 中文摘要……………………………………………………………………．．1 英文摘要……………………………………………………………………．．4 研究论文多重耐药铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌耐药基因研究 前言…………………………………………………………………．．7日lJ舌 …………………………………………………………………．．’7 材料与方法…………………………………………………………．．7 结果……………………………………………………………………．9 附图……………………………………………………………………“ 附表……………………………………………………………………14 讨论……………………………………………………．．……………．16 参考文献………………………………………………………………24 综述鲍曼不动杆菌对临床抗菌药物耐药机制…………………………．29 致谢……………………………………………………………………………39 个人简历……………………………………………………………………40 中文摘要 多重耐药铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌耐药基因研究 摘 要 目的：应用聚合酶链反应(PCR)方法检测我院呼吸重症监护室分离 到的多重耐药铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌p．内酰胺酶基因和整合子耐 药菌株亲缘性分析。 2009年12月间因慢性阻塞性肺疾病急性加重期，急性呼吸窘迫综合症， 老年重症肺炎，颅脑疾病继发感染行有创机械通气患者下呼吸道分离的铜 绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌。 2药敏试验采用K．B法鉴定分离的铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌对头孢 哌酮／舒巴坦、哌拉西林／他唑巴坦、头孢他啶、亚胺培南、美罗培南、阿 米卡星、环丙沙星、米诺环素、多粘菌素B9种抗菌药物的敏感性。并 物敏感性判断。本研究中多重耐药菌株的选取标准为对上述抗生素中3 类或3类以上药物耐药。本研究中共收集到33株多重耐药铜绿假单胞菌 和16株多重耐药鲍曼不动杆菌。 3PCR扩增模板制备采用蛋白酶K消化法制备模板液，并将制备好的模 板置于．20℃冰箱保存。 4基因检测应用聚合酶链反应法，共检测多重耐药铜绿假单胞菌和鲍曼 blaDHA， blaIMP， 1．sull)。将聚合酶链反应产物经2％琼脂糖凝胶电泳，出 剂基因(qacEA 现与阳性对照分子相当的目的条带判为阳性，用凝胶成像系统观察电泳结 果并摄像保存。 5核酸序列测定将整合子耐消毒剂基I丢lqacEA 回收后送测序。测得序列与GenBank核酸库已登录的序列作比对。 6菌株亲缘性分析．采用多基因聚类分析法，以多重耐药铜绿假单胞菌和 鲍曼不动杆菌的耐药基因为分子标志做检测结果的样本聚类分析。 中文摘要 结果：l抗菌药物敏感性试验结果33株多重耐药铜绿假单胞菌对多 粘菌素B100％敏感，其对阿米卡星和美罗培南耐药率均为45．45％，对其 余几种抗生素的耐药率较高，均在50％以上。16株多重耐药鲍曼不动杆 菌对多粘菌素B100％敏感，其对头孢哌酮／舒巴坦和米诺环素的耐药率 较低，分别为25．00％和31．25％。对其余几种抗生素的耐药率均达到50％ 以上。 2耐药基因检测结果33株多重耐药铜绿假单胞菌p．内酰胺酶基因检测 阳性3株(9．09％)，blaSHV (15．15％)，blaOXA一23， 毒剂基因检测qacEA 阳性2株(12．5％)，blaDHA2株(12．5％)，blaOXA．24l株(6．25％)，blaPER 因检测qacEAl．sull阳性16株(100％)。 国核酸库己登录的序列均相同。 4菌株亲缘性分析以多重耐药铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌的耐药基因 为分子标志做检测结果的聚类分析。33株多重耐药铜绿假单胞菌中l，23，