反义p38α基因转染对缺氧、牵张的烧伤血清复合处理心肌细胞保护作用与机制的研究.pdf

摘 要 第一章含大鼠反义p38d基因腺病毒载体的构建及鉴定 目的 构建大鼠反义p38Q基因腺病毒载体。 Q 方法用RT—PcR法扩增大鼠p38cDNA片段，连接到pTz57R载 I和HindIII双酶切鉴定携带反义p38 组质粒，将重组质粒pAdtrack—cmv—asp38Q酶切后所获得的反向p38 p38 Q。将获得的含目的基因片段的重组 Q的重组腺病毒pAd—asp38 腺病毒通过脂质体包裹方法转入293包装细胞内进行包装，最后将 pAd—asp38Q腺病毒经PcR法鉴定与氯化铯密度梯度离心法纯化。 结果经PcR法鉴定，成功构建大鼠反义p38Q腺病毒载体。 Q 结论用RT—PcR法扩增大鼠p38 cDNA片段，再与pTz57R等质 Q腺病毒载 粒分别重组和酶切鉴定，最后可成功构建大鼠反义p38 体。 关键词 Q 反义p38MAPK，重组腺病毒，基因 第二章反义p38 Q基因转染对缺氧、牵张及烧伤血清复合处理 心肌细胞的保护作用 目的研究反义p38a基因转染对缺氧、牵张及烧伤血清复合处 理心肌细胞的保护作用。 方法采用原代培养的乳鼠心肌细胞，体外建立烧伤血清十缺氧 +10％轴向静态牵张损伤心肌细胞模型，实验分组：正常组、烧伤血 清+缺氧+10％轴向静态牵张损伤组、反义p38Q转染后烧伤血清+缺 氧+10％轴向静态牵张损伤组及空腺病毒转染后烧伤血清+缺氧+10％ 轴向静态牵张损伤组。利用RT—PcR、westernblot、MTT法等测定各 组心肌细胞p38Q表达水平及凋亡率、细胞活力、细胞培养液中LDH 活性的变化。 结果 反义p38 Q转染能明显下调正常组心肌细胞p38Ⅱ的表 达，同时使烧伤血清+缺氧+10％轴向静态牵张损伤条件下心肌细胞的 p38 Q表达下调，并可显著减轻心肌细胞乳酸脱氢酶漏出，减少心肌细 胞凋亡，改善心肌细胞活力。而空腺病毒无此作用。 结论反义p38d基因转染对烧伤血清+缺氧+10％轴向静态牵张 损伤心肌细胞具有保护作用。 关键词烧伤，心肌细胞，反义p38Q，缺氧，机械牵张，凋亡 第三章反义p38 a基因转染对缺氧、牵张及烧伤血清复合 处理心肌细胞保护作用的机制 目的探讨反义p38Q基因转染对缺氧、牵张及烧伤血清复合处 理心肌细胞保护作用的机制。 方法采用原代培养的乳鼠心肌细胞，体外建立烧伤血清+缺氧 +10％轴向静态牵张损伤心肌细胞模型，实验分组：正常组、烧伤血 清+缺氧+10％轴向静态牵张损伤组、反义p38a转染后烧伤血清+缺 氧+10％轴向静态牵张损伤组及空腺病毒转染后烧伤血清+缺氧+10％ 轴向静态牵张损伤组。利用RT—PcR、western blot等测定各组心肌 B KB 2田胞TNF—Q，IL一1mRNA表达水平及NF—K Bp50、NF—KBp65、I Q表达水平的变化。 结果反义p38a转染能明显下调烧伤血清+缺氧+10％轴向静态 lI 0 牵张损伤作用下心肌细胞TNF—Q，IL一1ml{NA以及NF—KBp50、NF～ K KB Bp65的表