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北京协和医学院博士研究生论文
目 录
中文摘要………………………………………………………………………………………1
Abstract…………………………………………………………………………………………………………．3
盲前 言…………………………………………………………………………………………………………．5
1．硒的抗肿瘤作用………………………………………………………………．．5
2．结直肠癌的治疗………………………………………………………………。8
3．细胞凋亡概述…………………………………………………………………．．9
4．WNT／13．catenin通路………………………………………………………………………………12
4．1WNT信号通路与肿瘤……………………………………………………。12
4．213-catenin与肿瘤…………………………………………………………………………………12
5．FoxO蛋白家族与细胞凋亡…………………………………………………．．13
6．研究目的、内容及意义………………………………………………………16
6．1研究目的……………………………………………………………………16
6．2研究内容……………………………………………………………………l7
6．3研究意义……………………………………………………………………l7
材料和方法……………………………………………………………………………………。18
1．实验材料………………………………………………………………………．18
1．1细胞株………………………………………………………………………．18
8
1．2菌株和质粒…………………………………………………………………．1
1．3主要试剂……………………………………………………………………．18
1．4使用的抗体…………………………………………………………………．19
1．5PCR引物…………………………………………………………………………………………．20
1．6靶基因siIⅢA的合成………………………………………………………20
1．7主要溶液的配制……………………………………………………………21
1．8主要仪器……………………………………………………………………22
2．实验方法………………………………………………………………………．24
2．1细胞的培养、冻存及复苏…………………………………………………24
2．2Western
Bl‘)t………………………………………………………………………………………：!zI
2．3Annexin
V-FITC／PI双染流式细胞术凋亡检测…………………………．．27
2．4免疫共沉淀与GSTdown……………………………………………．．28
pull
2．5免疫细胞化学染色…………………………………………………………29
2．6细胞转染(IⅢAi及质粒转染)…………………………………………．29
2．7双荧光素酶报告基因实验…………………………………………………30
2．8细胞内活性氧检测(DCFH．DA探针法)………………………………。32
2．9
JC．1染色检测线粒体膜电势………………………………………………32
2．10细菌转化与质粒提取………………………………………………………33
2．1l RNA提取及基因表达分析………………………………………………．34
2．12染色质免疫共沉淀—“酶”处理染色质免疫沉淀(琼脂糖微球式)…．．37
2．13体外酶活性检测…………………………………………………………．．43
2．14肿瘤脏器组织的石蜡块制备及切片……………………………………．．46
2．15免疫组织化学技术………………………………………………………一46
北京协和医学院博士研究生论文
2．1
6电镜观察自噬泡形态……………………………………………………47
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