酶反应体系敞开式质谱快速监测研究.pdfVIP

摘 要 质谱已成为自然科学的基柱工具。其发展大致分为最初的真空、 大气压以及日益创新的常压式(敞开式)三个阶段。质谱分析趋于原 位分析、直接离子化、软电离方式等方向发展。 酶是具有催化功能的生物大分子，参与大量的生化过程，如代 谢途径或病理功能障碍，在生物界生化反应中起举足轻重的作用。 本文选择的乙酰胆碱酯酶、血管紧张素转化酶和脂肪酶三种在人体 中起重要作用的酶作为研究对象。 首次开创了一种新型的(溶剂)诱导相变萃取．毛细管直接电喷雾 压式质谱检测的弱势。主要工作如下： 1．以猪肺血管紧张素转化酶(ACE)水解底物马尿酰．组氨酸．亮 氨酸，黑曲霉属脂肪酶水解底物三丁酸甘油酯作为研究对象。使用 诱导相变萃取法萃取酶反应产物马尿酸和正丁酸，在优化的实验条 件下，使用毛细管直接电喷雾．质谱法测定马尿酸和正丁酸的生成 量，以评估ACE和脂肪酶的活性以及抑制活性。分别以喹那普利和 奥利司他为模型对本方法进行验证。选择马尿酸和正丁酸进行方法 学进一步验证。实现了准确快速、样品用量少的检测。并为酶标板 与本方法的商品化机械结合提供理论可行性依据。 2．基于前一章建立的诱导相变萃取一毛细管直接电喷雾．质谱 法，优化正离子模式测定下的实验条件，利用诱导相变萃取．毛细管 直接电喷雾．质谱快速检测了乙酰胆碱酯酶。选择碘化硫代乙酰胆碱 作为底物。采用诱导相变萃取法萃取酶反应产物硫代胆碱，毛细管 直接电喷雾．质谱法测定硫代胆碱的生成量，以评估乙酰胆碱的活性 以及抑制活性。并以石杉碱甲为模型对本方法进行验证。以硫代胆 碱类似物氯化胆碱为目标物进行方法学验证。并于本体系的诱导相 变萃取中，发现一个稳定的三相过渡系统，初步鉴定三相系统的成 分，并做推测。 3．利用毛细管直接电喷雾耦合离子阱质谱，开发了一种准确快 速、低消耗的检测方法，分析测定了硝苯地平、非洛地平、尼卡地 平和尼群地平四种二氢吡啶类钙拮抗剂。在复杂基质样品中，无需 采用复杂的样品前处理方式或者传统的色谱分离方法，即可成功实 现四种二氢吡啶类钙拮抗剂的快速定性及半定量分析测定。该方法 专属性高、有效避免基质中不利于质谱检测的缺点、分析速度快， 有望进行机械化改进并商品化，从而在更多的领域发挥作用。 关键词：乙酰胆碱酯酶；血管紧张素转化酶；脂肪酶；诱导相变萃 取；毛细管直接喷雾 ABSTRACT Mass becomeoneofthemost tool spectrometry(MS)has powerful inmodem science．Therearethree ofmass generationsspectrometry ale and techniques，which vacuum，atmospheric ofmass tendstoin—situ respectively．Thedevelopment spectrometry ionizationandsoftionization． analysis，direct are macromoleculeswith function Enzymes biological catalytic involved a numberofbiochemical asmetabolic large processes，such or a ro