人camp-依型蛋白激酶β抑制剂的克隆、表达纯化和性质结构分析.pdfVIP

复旦大学硕士论文 人PⅪD的克隆、表达纯化和性质结构研究 摘 要 cAMP依赖型蛋白激酶(PKA)在许多激素和神经递质的信号传递过程中起着 十分重要的作用。人cAMP依赖型蛋白激酶13抑制剂(人PKl0)能抑制PKA 催化亚基的活性。 通过大规模人类cDNA测序，我们从胎脑cDNA文库中克隆了人PKIp基 因。生物信息学分析表明该基因的cDNA具有1057个碱基，编码具有78个氨 基酸的蛋白，具有两个保守的氨基酸序列：即抑制PKA催化亚基活性的底物类 似物位点区和富含亮氨酸及疏水氨基酸的出核信号(NES)区。蛋白产物的分子 量为8468．2Da，等电点为4．69。将人PKI B的编码框亚克隆到表达载体pETl5 中，在E．coil BL21(DE3)PLYSs菌株中获得了高表达。表达产物经过热处理、 硫酸铵沉淀和DEAE 质(SDS—PAGE电泳显示单一条带)。电喷雾质谱确定了纯化后的蛋白质的分 子量为8468．0Da，说明该蛋白质是人PKIB。活性分析表明该蛋白质对PKA的 比活性是6．0×104