催化共振散射光法测定α-淀粉酶、过氧化氢和葡萄糖.pdfVIP

广西师范大学硕士论文 中英文摘要 催化共振散射光谱法测定α-淀粉酶、过氧化氢和葡萄糖 研究生：马 纪 导 师： 蒋治良 教授 专 业：分析化学 研究方向： 酶催化分析 中文摘要 第一部分：绪论 介绍了共振散射技术理论。综述了近年来共振散射技术在分析化学中的应用，介绍了 α-淀粉酶、过氧化氢和葡萄糖的分析进展。 第二部分：可溶性淀粉的共振散射光谱研究及其在α-淀粉酶活力测定中的应用 在0.8mg/ml 聚丙烯酰胺(PAM)存在条件下，可获得较稳定的平均粒径为317nm 的淀粉 微粒。它在423nm 处有一较强的共振散射峰。在50℃，pH 为5.3 的磷酸盐缓冲溶液中， 淀粉微粒被α-淀粉酶(α-amylase,AMS)催化水解成小分子，导致423nm 处共振散射峰强度 降低。在选定条件下，AMS 酶活力浓度在0.00835～0.501µg/ml(或0.00138-0.0827U/ml)范围 内与共振散射强度降低值△I 呈现良好的线性关系，其线性回归方程为△I= 155C+13，相关 系数R=0.9857 。本法应用于人体唾液α-淀粉酶活力测定，结果满意。 第三部分：HRP 酶催化-阳离子表面活性剂缔合微粒共振散射光谱法测定痕量过氧化氢 - - - 在醋酸缓冲溶液中，辣根过氧化物酶(HRP)可以催化H O 与过量的I 反应生成I ，I 2 2 3 3 分别与阳离子表面活性剂TDMBA、DDAC 、CTAB、ODC、CPCM、DPC 和TBAB 等形 成缔合物微粒TDMBA-I 、DDAC-I 、CTAB-I 、ODC-I 、CPCM-I 、DPC-I 和TBAB-I ， 3 3 3 3 3 3 3 该缔合物微粒均在460nm 处有一个共振散射峰。过氧化氢的浓度在0.17～172.8、0.432～ 172.8、1.728～259.2 、1.728～86.4、1.728～216 、0.864～259.2 和 0.864～86.4×10-7mol/L 范围内分别与各体系在460nm 处的共振光谱强度呈线性关系。其检出限分别为0.086、0.34、 1.72、0.46、0.36、0.64 和0.44×10-7mol/L 。本法应用于过氧化氢测定，结果满意。 第四部分：双酶催化-阳离子表面活性剂缔合微粒共振散射光谱法测定痕量葡萄糖 在醋酸缓冲溶液中，葡萄糖(G)在葡萄糖氧化酶(GOD) 的作用下生成葡糖糖酸和H O ， 2 2 - - - HRP 可以催化H O 与过量的I 反应生成I ，I 分别与阳离子表面活性剂十四烷基苄基二 2 2 3 3 甲基氯化铵(TDMBA)、氯代十六烷基吡啶(CPCM)和十二烷基苄基二甲基氯化铵(DDAC) 形成缔合物微粒TDMBA-I 、CPCM-I 和DDAC-I ，该缔合物微粒分别在460nm 、540nm 3 3 3 和430nm 处有一个共振散射峰。对于TDMBA、CPCM 和DDAC 体系，葡萄糖的浓度分 I 广西师范大学硕士论文