微损伤作用下IL-1、PGE2、IL-13对兔子宫主韧带成纤维细胞胶原蛋白表达的影响.pdfVIP

摘要 微损伤作用下IL．1、PGE2、IL．13对兔子宫主韧带成纤维细 胞胶原蛋白表达的影响 研究生姜永杰 导师任琛琛教授 郑州大学第三临床学院 河南 郑州450052 摘 要 研究背景 floor 盆底功能障碍疾病(pelvicdysfunctionPFD)是当代社会重要的妇科疾 患。其主要病因是盆底结缔组织的胶原含量下降及比例失调，引起筋膜和韧带 的支持作用减弱，导致脏器的移位或功能的障碍。受损的韧带和筋膜在修复过 inflammation 程中受到各方面的影响，比如受到盆腔炎(pelvic PID)的影响。炎症 1 可以释放诸多炎症细胞因子比如白细胞介素l(interleukinmq)、白细胞介素 13 13(interleukinIL-13)、前列腺素E2(prostaglandinE2，PGE2)，引起附近韧带组 织成纤维细胞炎症反应，诱导细胞凋亡，影响了成纤维细胞的迁移、粘附、活 动。从而导致女性子宫韧带修复功能不良，促进PFD发生。 目前研究表明成纤维细胞分泌I、lII型胶原影响着韧带组织的物理特性。胶 原的合成和分解受到严格的基因调控，胶原基因上游存在多种不同的正性或负 性调控序列。这些胶原基因在不同的情况下改变了成纤维细胞的合成程序，就 是因为众多的细胞因子和某些可以调控基因的药物对上述基因序列进行了向上 的调节和向下的调节，干预了主体细胞胶原基因的不同转录过程。研究证明ILl 在某些特定环境中促进成纤维细胞分泌IL-6等炎性介质，IL-1可能藉此发挥其 破坏成纤维细胞胶原形成的作用。多位研究人员检测到人I型胶原a 2基因是 IL-13诱导的靶基因，并且发现剂量依赖是IL-13诱导I型胶原基因和I型胶原蛋 白的表达的关键方式，PGE2在引起胶原纤维的损伤是否同时促进胶原纤维的生 摘要 长，现有的研究者中，没有一个明显的结论。特别是在盆底功能障碍性疾病模 型中的研究，IL-13、ILl、PGE2的研究还没有深入。 目 的 ·’ 本课题探讨通过制备兔子宫主韧带成纤维细胞微损伤模型，并且讨论不同 的炎症因子LI．1、LI．13，PGE2对微损伤后的兔子宫主韧带中成纤维细胞I、III 胶原合成代谢的影响。 材料与方法 1．原代培养大耳兔子宫主韧带成纤维细胞体外分离培养和鉴定。采用大耳 兔子宫韧带组织块进行韧带成纤维细胞的胰酶胶原酶联合法原代培养，通过形 态学及免疫组化法测定其胶原I、ⅡI蛋白含量对获得的兔子宫主韧带成纤维细 胞进行鉴定。 2．将试验用大耳兔的子宫主韧带体外培养后的成纤维细胞，进行体外的牵 拉损伤，有效的建立成纤维细胞微损伤模型：根据兔子宫主韧带的生物学特性， 采用细胞牵张损伤仪10％，1赫兹，连续12小时的牵张损伤对兔子宫主韧带成纤 维细胞负载，负载后鬼笔环肽染色，激光扫描共聚焦显微镜观察细胞骨架微丝 的变化，了解细胞损伤情况。台盼蓝染色观察细胞凋亡情况。 3．将兔子宫成纤维细胞分为正常细胞组、微损伤细胞组、IL-1与微损伤细 胞共培养组、PGE2与微损伤细胞共培养组、IL-13与微损伤细胞共培养组。按照 12d时、24小时、48dx时、72dx时进行细胞培养。同时选取每组起始点作为参 照。得出25组实验材料，每组细胞分别RT-PCR法检测成纤维细胞I、m型胶原 蛋白mRNA的表达，选取细胞标本进行免疫组化观察胶原蛋白的变化。 两两比较。各种检验方法均以Q=0．05为检验水准。 幺七 蟹 =口 木 1．胰