ROCKⅠ对PGF介导血管平滑肌细胞迁移分子机制的研究.pdf

ROCK I对PDGF介导血管平滑肌细胞迁移分子机制的研究 硕士生姓名：林海双 指导教师：高颖教授 专业名称：生物化学与分手生物学 摘要 目的：动脉粥样硬化(AS)是威胁人类健康的主要疾病之一，对于AS发病机 制一直是心血管疾病研究的热点。其中血管平滑肌细胞(VSMC)由中膜层向内膜下 间隙迁移并导致异常增生是动脉粥样硬化等心血管疾病发生发展的一个重要环 是Rho下游靶效应分子，分ROCKI和ROCKII两种亚型，参与细胞迁移、细胞 增殖、细胞粘附、细胞骨架重组等多种细胞行为，而这些功能又参与许多心血管 疾病的发生、发展，而ROCK参与细胞迁移的分子机制尚不十分清楚。有文献报 MAPK，ERK(胞外信号调 道，MAPK家族成员参与细胞的增殖和迁移，如p38 节激酶)。此外在细胞迁移过程中，基质金属蛋白酶(MMPs)可以广泛降解ECM， 介导血管平滑肌细胞迁移的模型，阐述ROCK I亚型调控血管平滑肌细胞研究的 分子机制，为阐明动脉粥样硬化发生机理提供理论依据。 方法：(1)利用瞬时转染和稳定转染方法过表达ROCKI，通过RNA和蛋白 水平检测ROCK chamber和划痕方法，检测ROCKI I的表达情况；(2)利用Boyden blot方法，在1 过表达后，细胞的迁移情况；(3)利用Westem Ong／m]PDGF刺激下， blot方法，在不同 检测P．ERK和p-p38在不同时间的表达情况；(4)利用Westem p-p38表达情况；(5)N用Boyden blot和明胶酶谱法，检测U0126 理下，检测对细胞迁移的影响；(6)利用Western 度U0126和SB203580处理下，检测抑制剂对细胞伪足形成的影响。 结果：(1)瞬时转染ROCK 的蛋白表达和活性；(6)u0126和SB203580减少细胞伪足的形成。 结论： (1)进一步证实ROCKI与血管平滑机细胞的迁移密切相关； (2)PDGF介导的细胞迁移，可能是通过I强。瓜OC列MAPK通路实现的， 并通过降解细胞外基质，为细胞迁移提供条件。 PDGF 关键词：ROCKI血管平滑肌细胞细胞迁移MAPK EffectsofROCKIon ofvascularsmoothmuscle migration cellsinducedPDGF by Master candidate：Lin degree Haishuang Gao Supervisor：ProfessorYing andMolecular Major：Biochemistry Biology Abstraet isoneofthe diseasesthatthreatenstohuman Objecfives：Atherosclerosis