产β-葡萄糖苷细菌菌株的筛选、酶的分离纯化及酶学性质的研究.pdf

中文摘要 中文摘要 本论文是基于B．葡萄糖苷酶在天然色素生产方面的作用而进行的研究。该 酶能够水解栀子苷产生京尼平，京尼平与谷氨酸钠等含氨基的化合物反应生成 色泽稳定、无毒无害的天然蓝色素。同时，京尼平本身也是一种天然的交联剂， 可以用于制作人造骨骼、伤口包扎材料，还能够促进胰岛素的分泌，缓解II型 糖尿病的症状。B．葡萄糖苷酶是纤维素酶系的重要组分之一，在植物纤维的降 解中不可或缺，它在食品、饮料、医药等领域有重要的应用价值。例如，它能 用来生产龙胆低聚糖、甜菊糖等低能量、高甜度、易代谢的天然甜味剂；能够 水解茶、葡萄酒和其他饮料中的糖苷类前体物质，从而增加饮料的风味物质； 可以水解大豆异黄酮，增加其在人体中的吸收率，从而有效降低心血管和骨质 疏松等疾病的发病率。 本研究共筛选了7份土壤样品，初筛得到18株能代谢B．葡萄糖苷酶水解栀 子苷的菌株。以pNPG为检测底物进行复筛，选取了一株活性最佳的菌株…．6C 进行后续实验。经过16SrRNA分析，结合形态学及生理生化特征的研究，该 菌株被鉴定为Bacillus Korlansys L发酵液。运用中空纤 6C菌株于37。C，180 h，得到7．5 rpm摇瓶发酵24 维素膜超滤，疏水层析、阴离子交换层析及凝胶层析等色谱技术进行分离纯化。 经疏水层析，发现6C菌株能代谢两种B．葡萄糖苷酶，分别记为酶A、酶B。 纯化结束后，酶A的纯化倍数为483．65，回收率为7．24％；酶B的纯化倍数为 kD，均由单个亚基组成。 分子量约为80kD，酶B分子量约为90 对来源于6C菌株的酶A进行酶学性质研究，发现最适反应pH为7．0，最 5-9的范围内，低于50。C的条件下具有很好的稳定 适反应温度为40℃；在pH 性，超过60℃酶活力迅速降低；酶A的底物专一性不高，能水解多种含B．糖苷 键的底物，但对0【．糖苷键不表现水解作用，其中，该酶的最适底物为oNPG， 则抑制该酶活性，其他离子对酶活的影响不大。 关键词B．葡萄糖苷酶，菌种鉴定，芽孢杆菌属，分离纯化，酶学性质 Abstract Abstract 13-Glycosidaseenzymesaroleinthenatural played pigmentproduction，this thesiswasabout theresearchbasedonthat cantransferthe to 13-glycosidase gardenin the withsodium andother containedamino genipin．Genipinglutamate compounds could naturalblueelementWaS which and produce stable，avirulent harmless．Besides， wasa natural canbeusedfor artificial genipin crosslinkingagent，which making bone， materialsof II