产油微拟球藻Nnnochloropsis oceanica IMET1藻际细菌的群落结构与功能研究.pdf

摘要 摘要 由于化石能源价格的不断上涨以及化石能源燃烧所造成的一系列环境问题，藻类作 为一种潜在的生物能源的制造者已经得到了广泛的关注。这就需要大规模的培养高浓度的 产油微藻，但是对于大规模培养过程中可能影响藻类的生长及稳定性的重要因素——藻际 细菌的多样性及功能至今还很少研究。细菌群落结构的变化往往会影响藻类的生长及生理 的变化。 在本研究中，首先尝试使用二叠纪地下水(Permianwater)培养1株具有产 ground oceanicaIMETl；同时应用可培养手段和两种不依赖 油潜力的微拟球藻Nannochloropsis GradientGel 培养的分子生物学手段——变性梯度凝胶电泳(Denaturing Electrophoresis， DGGE)和基于16SrRNA基因的克隆文库，研究在三个不同温度培养条件下藻际细菌群 落结构的变化。在此过程中我们分离到1株具有絮凝沉降藻细胞功能的细菌并对其进行了 鉴定，同时也对其絮凝沉降藻细胞的机理进行了初步分析。此外还通过脉冲场凝胶电泳技 术研究了产油藻微拟球藻ⅣoceanicaIMETl的基因组大小及染色体组成。主要实验结果 如下： 1、为了避免在产油藻培养过程中的“与人争水”的现象，我们利用采自美国德克 萨斯州因佩里亚尔的佩科斯河新生代海槽的二叠纪地下水，研究产油微拟球藻Ⅳ oceanica oceanicaIMETl在补 IMETl是否能够在二叠纪地下水中生长。产油微拟球藻M d 充少量氮源和磷源的二叠纪地下水中能够很好的生长，其脂含量也相对理想。在整个15 IMETl在 的培养周期中，三个温度下藻培养物的干重稳定增长．微拟球藻Ⅳoceanica 250C培养温度下的表现出最好的生长效率，15d时藻培养液的干重是初始接种时的8 IMETl的脂含量在初始3d内三 倍。由于添加足够的氮源和磷源，微拟球藻Ⅳoceanica 个培养温度下均降低，从40％降低到20％左右。 2、培养9d后，300C培养条件下的微拟球藻ⅣoceanicaIMETl培养液开始聚集沉 淀，而在150C和250C藻细胞在培养液中仍保持均一。随着藻絮凝沉降现象的出现， 300C细菌群落结构也发生了明显的变化。基于DGGE的分析表明，一些高G℃含量的 1 摘要 细菌仅在300C培养条件下出现，这与可培养细菌的数据一致。基于16SrRNA基因的克 隆文库分析也证实了300C培养条件下细菌群落结构的显著变化，而且有些细菌的序列只 能在这个温度下被检测到。 3、利用可培养的手段，我们从产油微拟球藻ⅣoceanicaIMETl的藻培养物中分离 纯化到I株新菌，命名为HW001。这株新菌表现出明显的絮凝沉降微拟球藻Ⅳoceanica IMETl的能力，藻和细菌共培养3d后大多数藻细胞被絮凝沉降，而藻细胞的脂含量却没 有受到很大的影响。对HW001絮凝沉降产油微拟球藻ⅣoceanicaIMETl的机理的初步 研究表明，‘HW001和微拟球藻Ⅳoceanica的接触对于絮凝沉降来说是必须的。另外， HW001不仅能够絮凝沉降微拟球藻Ⅳoceanica IMETl，还能够絮凝沉降应用于本研究的 微拟球藻ⅣoceanicaCT-1，生物扁藻Tetraselmissuecica和Zchuii等3株真核微藻和1株 WH8007。 蓝细菌聚球藻Syne