利用核糖核酸干技术获得含高支持链淀粉且抗病毒的转基因马铃薯.pdf

利用核糖核酸干扰技术获得含高支链淀粉且抗病毒的转基因马铃薯 摘要 马铃薯(勋肠n铭m玩6e阳s铭m L．)淀粉在食品及化工领域都有广泛的应用价 值，淀粉的糊化和凝沉特性是其应用的重要参考指标。支链淀粉具有易糊化、 不易老化等特性，被广泛应用于造纸业、纺织业和粘胶剂生产等领域；直链淀 粉常被用作脂肪替代物。马铃薯病毒病是影响马铃薯产量和品质的重要病害， 目前，利用分子生物学方法调控作物淀粉合成过程中相关酶基因的表达以及沉 默病毒基因，从而降低淀粉糊化温度与改善凝成性，实现植物抗病。本文利用 对蛆干扰技术通过调控马铃薯块茎中颗粒结合性淀粉合成酶基因 (Granule_boundstarch 扰病毒外壳蛋白基因的表达，获得了含高直链淀粉且抗病毒的转基因马铃薯植 株。 本文第一部分内容是构建含有一种或多种病毒外壳蛋白基因与觥基因 鉴定筛选阳性克隆，利用Real．time 沉默效率达98．21％的转基因马铃薯，碘染色转基因试管薯淀粉颗粒，删沉默 效率为98．2l％的转基因试管薯淀粉颗粒为红褐色，非转基因试管薯淀粉颗粒为 2株、低于50％的转基因植株2株进行病毒接种，经Real．timePCR检测转基因 loo％，从而获得了含高支链淀粉的抗病毒转基因马铃薯。 本文第二部分内容是通过删除载体中的选择标记基因，获得了无选择标记 载体，分别构建以G脚基因启动子驱动的G膦基因中端反义序列，C心Ⅳ35S 启动子驱动的G脚基因中端反向重复序列的两种无筛选标记载体，通过农杆菌 转化马铃薯植株，共获得了455株马铃薯转化株，经PCR鉴定得到阳性转基因 植株1株，通过Real．time 制黜表达的无筛选标记转基因马铃薯。 关键词：核糖核酸干扰；抗病毒；支链淀粉；直链淀粉；无筛选标记转基因马 铃薯 AMYLOSE．FREEANDVIRUSRESISTANT 0BTADⅡNG LINESUSINGRNAiTECHNOLOGY ABSTRACT foodand hasbeen usedint11e Potato(‘SfD肠陀扰聊觑6B加s钇聊L．)starchwidely industrial hastwo suchas 印plications．Amylopectinproperties a11dfaintish hasbeenusedin and temperature retro伊adation，Which p印er，teXtile usedin substitute．Three adllesives hasbeen m匈orpotato indus时．Amylose adipose vimses：Potatovims Vims Potato1eafrollVirus X(PVX)，PotatoY(PVY)and 10sseseach is touse yield year．Itpossiblegene (PLRV)causesignificallt toVimsesand that Virus to resistance silences the印