利用甘蔗废糖蜜酵生产L-乳酸的初步研究.pdf

利用甘蔗废糖蜜发酵生产L一乳酸的初步研究 摘要 乳酸是重要的工业有机酸，在多个领域有着广泛的应用。乳酸根 据旋光性的不同，分为D一乳酸和L一乳酸两种。本研究以提高产量为 目的，分别用分子生物学和发酵学的方法，对D一乳酸脱氢酶的表达 和L～乳酸的发酵生产进行了初步研究，为下一步实验打下基础。 本实验尝试使用基因敲除方法，破坏鼠李糖乳杆菌染色体中的 D一乳酸脱氢酶基因，阻断D一乳酸代谢途径，从而提高L一乳酸产量。 首先从鼠李糖乳杆菌原始菌株中克隆出D一乳酸脱氢酶基因，通过与 载体pSE380和pET22b连接，构建了重组质粒，转化入大肠杆菌表达 宿主B121中实现了D一乳酸脱氢酶的表达。酶活力检测和蛋白质SDS一 聚丙烯酰胺凝胶电泳结果都验证了结果正确。然而基因敲除实验没有 成功，但本实验为后续实验打下了基础。 本研究通过对鼠李糖乳杆菌原始菌株进行紫外诱变和钴60诱 变，筛选得到一株高效产L一乳酸的诱变菌株鼠李糖乳杆菌 瓯卜』D—JD一鲫，并以甘蔗糖蜜为主要原料，探索用此诱变菌株发酵生 产L一乳酸的可能性。通过设置单因素实验，对该诱变菌株的发酵条 件做了初步研究。实验结果表明，诱变菌株鼠李糖乳杆菌 瓯卜』秒一J口捌在初始糖蜜浓度为20％(w／v)、加入4％(w／v)固体碳 酸钙作为pH调节剂、接种量为6％(v／v)．等发酵条件下，于37℃下 发酵40小时，可最高产出1069／L的L一乳酸。此外，本研究发现， 利用甘蔗糖蜜配制的发酵培养基还具有发酵液保持液态而不凝结的 特点，更有利于产物的分离。因此，本研究的结果显示，利用廉价的 甘蔗糖蜜为原料来生产重要的工业有机酸L一乳酸完全可行。本研究 的结果展现了较高的工业应用价值，为后期工业生产提供了理论依 据。 关键词： L一乳酸D一乳酸脱氢酶钴60诱变紫外诱变甘蔗糖蜜 鼠李糖乳杆菌 II inL—lacticacidfementation Prelimina叫stlldy byusing molasses sugarcane ABSTRACT Lacticacidisan indust血l been acid，haswidely iInponam o玛anic in tothedi虢renceof manyareas．According opticalactiVi劬 applied acidandL．1aCticacid．晰mthe lacticacidisdividedintoD．1actic a onme ofincrease conducts pu印ose output，thisstudy prelimina巧study fermentationofL-1actic ofD—lactate andthe expression dehydrogenase acid themethodsofmolecularand byusing biologyz严ology’which1ay forthenext thefirststone experiments． This