华南湍蛙皮肤新多功能抗菌肽的纯化、鉴定、cDNA克隆与功能分析.pdfVIP

摘 要 湍蛙属隶属于两栖纲无尾目蛙科，作为蛙科各属中较为庞大的一个类群，全世界分 布有45个种。目前关于湍蛙属两栖类皮肤分泌物中抗菌肽的报道较少，对于湍蛙属两栖 类抗菌肽结构和功能方面的研究仍很匮乏。本研究利用蛋白质纯化技术结合蛋白质组学 技术，首次成功从分布于中国西南部山区的华南湍蛙皮肤提取物中纯化并鉴定出3种新 型抗菌肽，确定了他们的分子结构和功能活性。同时成功从华南湍蛙cDNA文库中克隆 到5条抗菌肽cDNA序列，能够推导出5条不同的抗菌肽前体，并能够释放5种不同的成熟 抗菌肽。这些成熟肽中的其中3条与纯化出抗菌肽结构相同。经分析这5条抗菌肽隶属于 。 肽家族 ， 和brevinin．2 2个多 它们分别 是brevinin．1 (FLGSLLGLVGKVVPTLFCKISKKC)、brevinin-1 RTa、brevinin—lRTb 白质组学方法从华南湍蛙皮肤分泌物中除鉴定到了纯化出的这3条多肽外，同时也鉴定 功能活性，经过抗菌活力测试发现本研究中鉴定出的所有多肽对所试的多种微生物显示 对较低，这一发现可能被用于开发新型抗菌药剂。 关键词：两栖类；华南湍蛙；蛙皮；抗菌肽 III Abstract Asoneofthe areatotalof45 of inthe largeamphibiangroups，there speciesAmolops antimicrobial inthis hasnotbeen world．However,the extensively peptidesexisting genus studied．Asoneofthe areatotalof45 of that largeamphibiangroups，there speciesAmolops areknowntodistributefromwesternandsouthern afewof mainly Asia．However,only AMPshavebeencharacterized this fivenovel previously．Instudy,cDNAsencoding antimicrobial werecloned theskin—derivedcDNA peptide(AMP)precursorsbyscreening ricketti,a thatexistsinsouthernandwesternofChina． libraryofAmolopsfrogspecies parts Protein ledtotheidentificationoffivededuced to sequenceanalysis peptides，threebelonging thebrevinin-1andtwo tothebrevinin-2of