对虾白斑综合症毒LAMP-LFD检测方法的建立.pdfVIP

摘要 摘要 isothermal nucleicaciddetectionlateralflow 测侧向层析试纸(FITC 结合建立了更为灵敏、特异、有效、更适合实地检测的WSSV检测方法 LAMP．LFD。 基因序列，设计两条特异性的引物对其进行PCR扩增，并将产物与pDM．19T V4 连接构建重组载体pDMT-VP28；依照LAMP技术原理，利用PrimerExplorer 设计了四条引物利用构建的VP28重组载体为标准模板，优化建立了WSSV的 LAMP检测方法；而后对WSSVoDNA为模板进行十倍系列稀释，并以其为模板 利用异硫氰酸荧光素(fluorescein 抗血清效价，并对血清敏感性和特异性进行鉴定以确定细胞融合备用鼠。结果 显示：1号小鼠pAb效价最高，对FITC的半数抑制浓度最低，选择用1号小鼠进行 融合。利用杂交瘤细胞技术制备FITC单克隆抗体(Monoclonal antibody，mAb)， 经筛选得到6株高度敏感特异的杂交瘤细胞；以1Bll体内诱生腹水制各单克隆抗 特异性强的FITC．mAb。 柠檬酸三钠还原法制备胶体金并将其按3pL／条的量喷至玻璃纤维塑薄膜上； 以0．5mg／mL的亲和素和lmg／mL的山羊抗鼠IgG按照1．21．tL／cm得量分别标记 NC膜上的检测线(T线)和控制线(C线)；组装FITC核酸检测侧向层析试纸 摘要 测方法：根据该试纸检测不同条件下的扩增产物得到的结果，优化得到最适检 测用LAMP扩增条件；而后对WSSV-DNA为模板进行十倍系列稀释，并以其为模 检测方法灵敏度相同。 纸 Abstract Abstract Inthis had aWhite study，wedevelopedspotsyndrome called isothermal conbinedit procedureLoop-mediatedamplification(LAMP)and withFITCnucleicaciddetectionlateralflow LAMP- dipstick(FITC-LFD)，called isaneffectiveandeconomicalwith LFD，which assay highsensitivity，more is fitableforclinic very diagnosis． specificity，and theLAMP setoffour were According principle，a specificprimersdesignedby Primer ontheconservativeofWSSV 28 V4，based Explorer gene envelopeprotein of as in therecombinant a pMDT-V