对虾肠道益生菌凡纳滨对虾非特异免疫力和抗病力影响的研究.pdfVIP

对虾肠道益生菌对凡纳滨对虾非特异免疫力和抗病力影响的 研究 摘 要 高密度集约化的对虾养殖业在世界范围内兴起，由对虾自身和外界环境引起的 各种细菌性、病毒性疾病严重制约了该产业的持续健康发展，同时也带来了严重的 经济损失。在此背景下各种措施应运而生，但抗生素，消毒剂和杀虫剂等治病的传 统方法得到了质疑，可替代方法在不断探索之中，提高机体自身免疫力和抗病力是 解决这一难题的重要思路之一。近年来益生菌作为控制水产养殖疾病的可替代途径 引起热议，相关报道从益生菌应用的良好效果，无污染和安全性等方面均做了细致 研究。本论文将分离自健康对虾肠道的几株益生菌进行不同的配伍添加在对虾基础 饲料中，以观察其对对虾非特异性免疫力和抗病毒能力的影响，同时进行了部分分 子生物学分析以期为益生菌的作用机理提供一定的理论基础。主要研究内容和结果 分以下几方面：． damselae) 和溶藻弧菌(Vibrio x 和抗病力的影响：坚强芽孢杆菌活菌(不少于1．0108CFU／g饲料)分别与美人鱼 发光杆菌(1％)和溶藻弧菌(1％)灭活菌配伍后加入基础饲料作为免疫饲料。以 基础饲料为对照组，整个实验过程采取间隔投喂(之前被验证为效果较好的投喂方 为15d。实验期间每5d采集各实验组对虾血淋巴，处理后用于超氧化物歧化酶 溶菌酶(uL)活力的测定。感染后每天记录对虾死亡数，并统计对照组和实验组的 累计死亡率。结果表明，各免疫组超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)、 酸性磷酸酶(ACP)、一氧化氮合酶(NOS)活性整体上均显著高于对照组，但饲 料中添加益生菌对溶菌酶活性物显著影响。累计死亡率结果表明：添加坚强芽孢杆 菌和美人鱼发光杆菌混合组的抗病毒能力最强(10．71％)，显著高于对照组 (64．28％)，其次是坚强芽孢杆菌和溶藻弧菌混合组。研究结果证实：在饲料中添 加益生菌可显著提高凡纳滨对虾非特异性免疫酶活性和抗病毒能力，其中尤以坚强 芽孢杆菌和美人鱼发光杆菌的复合菌组效果最佳。 damselae) 和溶藻弧菌(Vibrio 群的影响：按第一部分中进行配伍后制备免疫饲料，实验分组和处理同前。实验期 间每5d无菌条件下取对虾肠道匀浆，一部分用于消化酶(胃蛋白酶，淀粉酶和脂肪 酶)活性的测定，一部分进行梯度稀释后涂布2216E固体培养基进行细菌菌落计数。 结果表明，饲料中添加益生菌的免疫组对胃蛋白酶，淀粉酶和脂肪酶均表现出一定 的规律性，在免疫阶段和感染阶段整体上都是先上升后下降，且这个实验阶段的最 大值一般出现在实验25d，在实验结束时又大体回落至实验初期水平。整个实验期 间各免疫组的消化酶活多数阶段均显著高于对照组(P0．05)。这种规律变化说明 饲料中添加的益生菌对凡纳滨对虾的肠道具有调节作用，由免疫期间的先上升后下 降可以看出益生菌的这种调节作用并不是无限增加的。在感染阶段，出现先上升后 下降的趋势，说明益生菌对病毒感染能做出相应反应，但其反应也不是持续不变的。 在肠道菌群变化上，坚强芽孢杆菌和美人鱼发光杆菌混合菌组的可培养细菌总数和 结果表明，饲料中添加肠道益生菌可显著改善对虾肠道消化酶活性并对肠道菌群有 一定调节作用，这与益生菌在宿主体内发挥作用的主要途径是一致的。 damselae) 和溶藻弧菌(Vibrio 的影响：实验以基础饲料为对照组，以添加坚强芽孢杆菌活菌(不少于1．O×108CFU／g 饲料)和美入鱼发光杆菌(1％)和溶藻弧菌(％)的饲料为免疫组。每组3个重复， 实验期间进行间隔投喂。每5d取各实验组lO一15尾对虾抽取血淋巴离心后收集血细 3000进行实时定量 歧化酶(SOD)基因和酚氧化酶原(proPO)基因用Rotor-gene PCR扩增，用2以6cT法进行各基因mRNA相对表达量的分析。结果表明，在饲料中 添加益生菌对酚氧化酶原(proPO)基因的相对表达