尼古丁刺激树突细胞抗HBV的实验研究.pdf

摘要 摘要 BVirus，HBV)感染是一个全球性的公共健康问题， 乙型肝炎病毒(Hepatitis 其慢性感染引起的病毒性肝炎是严重威胁人类健康的常见病和多发病。目前对 HBV的慢性感染尚缺乏非常有效的治疗手段。临床上具有持续性疗效的方法是 利用IFN-0t进行系统治疗，可在40％患者体内取得抑制HBV复制的效果，但 仅有5％～10％接受治疗的患者HBsAg转阴。此外，利用核酸类似物如拉米夫 DNA水平并使得症状好转，但 定(1amivudine)进行治疗可以快速降低血清HBV 短期治疗会导致肝病迅速复发，长期治疗易形成抗性病毒变异株。近来对HBV 感染的过继性免疫治疗研究日益增多，过继免疫治疗普遍采用体外抗原负载树 突状细胞(Dendritic Cell，DC)后回输体内的方法，如将HBsAg负载的DC回 输至HBV耐受者体内，可诱导出HBV特异性的免疫反应，抑制病毒复制，但 这种方法诱导DC抗病毒的效率有待提高。因此，发现新的抗HBV的治疗方案 非常必要。 DC是体内功能最强的抗原提呈细胞(AntigenCell。APC)，作为 Presenting 适应性免疫应答的启动者，在机体抗病毒免疫反应中发挥重要作用。有研究发 现，HBV感染可造成DC功能的异常，包括共刺激分子表达的下调和抗原 提呈能力的下降等。尼古丁是烟草中的一种主要成分，近年来已被作为药物 广泛应用于神经退行性疾病、结肠癌和唐氏综合症的治疗。我们的前期研究 发现，尼古丁刺激可上调DC表面共刺激分子的表达，增强其抗原提呈能力。 将尼古丁刺激的DC回输至小鼠体内可达到预防和治疗肿瘤的目的。由于机 T 体抗肿瘤和抗病毒都需要抗原特异性的杀伤性T细胞(Cytotoxic 反应具有相似的效果。本研究是将尼古丁刺激DC用于抗病毒的尝试和探 索。 Blot和流式细胞术(Flow 本研究中，我们首先以Western Cytometry, n 摘要 Fluorescent 的表达明显提高，MR的平均荧光密度(Mean Intensity,MFI)从 63．68增加到76．35。然后，我们以尼古丁刺激DC，联合HBV抗原或抗原肽 负载后，与同种异型T淋巴细胞进行混合淋巴细胞反应(MixedLymphocyte Linked 我们发现，尼古丁刺激可增强DC介导HBV特异性T细胞增殖的能力，并促进 MLR中IL．12的分泌。表明尼古丁刺激可增强DC的抗原提呈功能并促使DC 诱导Th0向Thl方向极化。我们又进一步将尼古丁处理联合HBV抗原负载的 Linked DC回输至小鼠体内，以酶联免疫斑点试验(EnzymeImmunospot, ELISPOT)检测HBV特异性CTL的增殖，乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase， LDH)释放法检测CTL的功能。结果显示，尼古丁刺激可增强DC诱生HBV 特异性CTL的能力，并对靶细胞具有特异性杀伤功能。考虑到临床应用的可能 性，我们比较了尼古丁与IFN—y、IL．15和IL．18在增强DC功能上的优劣，结 果发现：在介导HBV特异性T细胞增殖方面，尼古丁刺激DC的效果优于IⅢ吖， 和IL-15，与IL．18相似。最后，我们通过阻断相关的信号通路初步探讨了尼古 丁刺激增强DC功能的