岩藻糖基转移酶的表达促进A431细胞增殖.pdfVIP

岩藻糖基转移酶Ⅶ的表达促进A431细胞增殖 硕士研究生： 王娇 指导教师： 燕秋教授 指导小组： 杨雪松副教授 专业名称： 生物化学与分子生物学 摘要 目的：肿瘤是目前导致死亡的常见原因之一。肿瘤的发生发展是一个多步骤、 多因素调节的复杂过程，并以细胞的异常增生和转移为主要特征。许多肿瘤细胞 表面表达糖复合物(包括糖蛋白，糖脂及蛋白聚糖)。这些糖复合物与肿瘤细胞 的增殖和转移等生物学行为密切相关。 岩藻糖(fucose，Fuc)是一种脱氧己糖，在人体中各个组织中广泛存在。许 多糖复合物糖链中含有岩藻糖残基。这些岩藻糖残基赋予糖复合物多种生物学作 用，引起一系列生物学效应。近年的研究发现，某些表达于肿瘤细胞表面岩藻糖 化的寡糖链，参与调节肿瘤细胞增殖和转移等过程，这些岩藻糖化的寡糖与肿瘤 carbohydrate 化生成。 岩藻糖基转移酶催化底物发生岩藻糖基化反应，生成相应的路易斯寡糖 (Lewis oligosaccharides)。目前在人类基因组中发现了十三种岩藻糖基转移酶。 催化底物生成sLeX，也是合成sLeX的关键酶。研究发现，FUT7在许多肿瘤中异常 表达。本文通过上调A431fl中瘤细胞中FUT7基因表达的实验研究，初步探讨FUT7 在肿瘤细胞增殖中的作用，为研究岩藻糖化的路易斯寡糖合成的调控与肿瘤细胞 增殖的关系提供理论依据。 方法：实验采用上皮来源的人子宫内膜癌细胞系A431，将A431细胞分为三组， (1)未加任何药物处理的对照组；(2)转染空载体的载体组；(3)瞬时转染 FUT7．eDNA的转染组，进行如下实验：(1)在基因和蛋白质水平分别检测各组 FUT7基因的表达水平，分析其表达差异。(2)根据MTT比色法测定结果，绘制 blot的方法分别检测各组增殖细胞核抗原(PCNA)在基因和蛋白水平上表达的差 异。 结果：(1)瞬时转染FUT7．eDNA后，RT-PCR和WesternBlot结果显示转染 F1『T7．eDNA的转染组较对照组及载体组，FUT7基因表达增加，而对照组与载体 组FUT7基因表达无显著差异。(2)MTT细胞生长曲线显示，与对照组及载体组 Blot 分析结果表明，转染组的PcNA基因表达明显增加，而对照组与载体组PCNA基 因表达无显著差异。 使A431细胞中PCNA的表达增加。 关键词：岩藻糖基转移酶Ⅶ增殖细胞核抗原细胞增殖A431细胞 2 VII of Promotes ExpressionFucosyltransferase 1 A43cell proliferation Master candidate：Jiao degree Wang Yan Supervisor：ProfessorQiu Professor Vice—supervisor：AssociateXuesongYang andMolecular Major：BiochemistryBiology Abstract hasbecomeoneofthemostcommoncausesofd