微核糖核酸簇mR-302-367和miR-106a-363促进iPS细胞生成及其机制.pdfVIP

摘 要 摘 要 诱导多能干细胞（iPS）和微核糖核酸（miRNA），是近年来生命科学研究的 两个热点。但对于 miRNA 在直接重编程中如何被调控，以及如何参与调控重编 程，人们知道的还较少。本文中研究了 miRNA 与重编程的关系，目的是发现一 些促进重编程的miRNA，并阐释其作用机制。 本研究报道了在小鼠重编程模型中，miR-302-367簇和106a-363簇促进重 编程的作用，并揭示了miR-302-367簇通过加速间充质-上皮细胞转变来促进重 编程这一机制。 第1章描述了胚胎干细胞、多能性、诱导多能干细胞、miRNA的背景知识， 详细介绍干细胞多能性的核心调控网络，诱导多能干细胞研究的最新进展， miRNA和干细胞多能性调控、重编程的联系。 第 2 章详细描述了我们对 miRNA 簇和重编程关系的研究结果。逆转录病毒 介导的 miRNA 簇 miR-106-363 和 miR-302-367 的过表达可以显著提高不同条件 下小鼠的重编程的效率。这种方法得到的 iPS 细胞，可以通过包括可以形成具 有生殖系传递能力的嵌合体在内的各种多能性检测。 第 3 章探究了 miRNA 促进重编程的机制。发现重编程转录因子通过直接或 者间接的方式调控了两个簇中一些miRNA的表达。确定了在miR-106-363簇中， 只有 miR-106a、20b；在 miR-302-367 簇中，只有 miR-302b、c、a、d 才具有 对重编程的促进作用。数据显示 miR-302-367 促进重编程细胞的增殖。进一步 的实验证实 miR-302-367 簇通过降低 Tgfβ-receptor 2、促进 E-cadherin 表 达、加速间充质-上皮细胞转变来促进重编程中的克隆生成。我们的工作展现了 一种新颖有意义的通过 miRNA 来促进重编程的方法，并为多能性和上皮细胞表 型的联系提供了更多证据。 第4章探讨了微核糖核酸直接诱导重编程的可能性。 全面认识 miRNA 等非编码 RNA 与细胞命运的调控，利用 miRNA 优化更安全 高效的重编程方法，将是进一步研究的方向。 关键词：诱导多能干细胞 重编程 多能性调控网络 微核糖核酸 miR-302-367簇 miR-106-363簇 间充质-上皮细胞转变 I ABSTRACT ABSTRACT Induced pluripotent stem cells (iPS) and microRNA (miRNA), are two hot research topics in life sciences in the past few years. However, little is known on how miRNAs are regulated to control and participate in the reprogramming process. In this study, we examined the relationship between miRNAs and reprogramming in order to identify some miRNAs that could promote reprogramming and to understand their potential mechanism. In chapter 1, the general backgrounds on pluripotency, embryonic stem cells, iPS cells and miRNAs are reviewed. The core regul