玉米细胞分裂素元信号系统基因的分析及调控研究.pdfVIP

摘 要 细胞分裂素在植物的生长发育过程中发挥着非常重要的作用。 本研究采用采 用生物信息学与分子生物学相结合的手段对玉米全基因组的细胞分裂素双元信 号系统基因进化和表达分析，并对细胞分裂素反应调节因子 ZmRR5基因过量表 达以及 RNA 干涉的分子调控进行研究，获得如下主要结果：  1.  运用生物信息学分析了玉米全基因组的细胞分裂素双元信号系统基因。 在玉米全基因组中共获得了 48 个双元信号系统基因。包括  11 个 ZmHKs,9 个  ZmHPs,28个  ZmRRs(21 个 A 型 ZmRRs,7个 B 型 ZmRRs)。  2.系统进化树分析显示玉米和水稻在双元信号系统基因进化上比拟南芥更 近。染色体定位分析发现，玉米双元信号系统内的复制基因在进化树中表现出进 化距离较近。 通过半定量 RT­PCR技术分析 ZmRR基因发现其表达具有组织特异 性。  3.  通过 RT­PCR 获得 ZmRR5 的基因全长，并构建了过表达载体和干涉表达 载体。再利用原位转化(In planta)方式，获得了 ZmRR5 的过表达转基因玉米和干 涉表达转基因玉米。通过 PCR 和 southern 杂交，筛选出各转基因植株的单拷贝 转基因株系。  4.  与野生型相比，在外源细胞分裂素 6­BA 的处理下，ZmRR5 过表达转基 因玉米表现出敏感性下降，ZmRR5 干涉表达转基因玉米表现出过敏感。在不同 浓度的 ABA 和 2，4­D 的处理下，野生型和转基因植株没有表现出差异性。这 种现象说明 ZmRR5 仅是细胞分裂素的反应调节因子，其他激素对于 ZmRR5 没 有作用。 关键词：玉米，细胞分裂素，双元信号系统，RT­PCR，过量表达，RNA干涉 I  Abstract  Cytokinins play many vital roles in plant development and physiologyprocess.  To be better understand the role of two component signaling system in maize, we  analyzedTCS genes byusing bioinformatics and molecular biology method in this  study. The expression patterns of TCS components in the transgenic plants with both  overexpressed and RNAi for ZmRR5 gene were investigated. The results were  showed as following:  1. Using bioinformatics software, a total of48 genes had been found to encode  putativeTCS genes, including 11 ZmHKs, 9 ZmHPs, and 28 ZmRRs (21 A­type  ZmRRs and 7 B­type ZmRRs).  2. Based on phylogenetic analysis, the closed relationship of TCS genes were  found betweenrice and maize.The duplication of these two­component system genes  on the maize chromosomes corresponded to the clustersof these genes in the  phylogenetic trees.The RT­PCR results showedtissue­specific expression in ZmRRs.  3.After ZmRR5 genes was obtained,the overexpression vector and RNAi vector  ofZmRR5 genes were constructed and trans