瑞氏木霉疏水蛋HFBⅠ的表达、纯化及性质研究.pdfVIP

摘要 摘要 疏水蛋白是高等丝状真菌在特定时期产生的一类具有特殊理化性质的小分 子量蛋白质，它们可以在两相界面自组装成膜，使疏水性表面的亲水性增强，而 亲水性表面的疏水性增强。真菌疏水蛋白序列包含八个保守的半胱氨酸残基，作 为一种高效能表面活性剂，在很多方面有着巨大的应用价值，目前已进入研发阶 段的如医学领域(包括药物分散、药物缓释以及组织工程支架修饰等)、生物芯 片、生物传感器、食品应用(包括果蔬保鲜、乳化剂等)等，是一种非常有潜力 的新型表面活性材料。 瑞氏木霉(Trichodermareesei)又称里氏木霉，是一种可以水解纤维素的丝 状真菌。HFBI是瑞氏木霉中发现的第一个疏水蛋白，其遗传以及生化特性已经 了解比较清楚。该蛋白基因编码97个氨基酸，切除信号肽后获得的成熟蛋白包 含75个氨基酸。灰树花是一种具有很高营养价值和药用价值的可食用真菌，该 菌种中提取出的疏水蛋白有着更大的食品应用优势。目前在灰树花中唯一发现的 I型疏水蛋白为HGFI，本实验室已经从真菌灰树花中提取并鉴定得到该蛋白， 而且获得了他的DNA序列，并在毕赤酵母中成功表达，为本实验提供了很好的 研究背景。 本实验希望通过这两个分属于I型和II型的疏水蛋白在性质和应用上的对 比，更好的解释两型疏水蛋白的差异性，揭示HFBI作为II型疏水蛋白在乳化性 上更广阔的应用前景和在食品工业上的贡献。同时本实验还首次将HFBI构建于 毕赤酵母中进行表达，利用实验室现有的疏水蛋白表达系统，来探索HFBI表达 量的进一步突破。 本实验的基本思路是，从瑞氏木霉中克隆得到hfol基因，利用pPIC9作为 表达载体，在毕赤酵母GSl15中实现HFBI蛋白的成功表达，并通过快速银染及 等检测，验证其性质仍然保持疏水蛋白的特性，如改变表面的亲疏水性等，再以 HGFI为对照，对比其在乳化性(包括维持水油分散体系的稳定性以及啤酒爆瓶 等)等方面的差异。结果证明，经毕赤酵母表达的HFBI蛋白不仅维持了原有的 性质，同时表达量也很可观，为大量纯化HFBI蛋白提供了参考。在其次进行的 应用试验中，HFBI也表现出预期的优势。 HGFI 关键词：真菌疏水蛋白HFBI 乳化性 爆瓶 Abstract Abstract areaclassofsmall secretedfilamentousina Fungalhydrophobins proteins by fungi specific with andchemic havea thatisself- special specialproperty period physical properties．They at interfaces the of assemblinghydrophilic-hydrophobicenhancinghydrophilicityhydrophobic are surfaceandthe of characterized byeight hydrophobicityhydrophilicsurface．Hydrophobins as conscrvcdresidues havea