甜菊苷的定向转及产物甜茶苷的分离纯化.pdfVIP

摘要 922074 ’Y11删煳 摘要 甜菊糖是从甜叶菊(P1，妇，．P6口“魂口以口ben011i)中提取的一种天然甜味剂，主要成分 为甜菊苷(SS)和莱鲍迪甙A(RA)。甜茶苷限S)是从高山植物甜茶中提取出来的天然甜 味剂，产量低且受地域条件的限制，如果能用生物转化的方法将SS转化为RS，可为 RS的生产提供全新的方法，减少因种植甜茶而带来的山地生态破坏。 本工作筛选了一株能特异性转化甜菊苷为甜茶苷的细菌。结合菌体、菌落的形 态特征及16S rDNA序列鉴定，确定其为黄杆菌(国研，e06口c纪，f“垅踱，专利保藏号 为CCTCC NO：M209202)。该菌能专一性对SS进行转化，而不作用于甜菊糖中的 其他成分。 经单因素试验，优化了该菌的培养条件，结果表明，木薯淀粉1％，蛋白胨1‰ 0．5％，Nacl K2HP040．5％，Ⅺ也P04 0．2％，硫酸镁0．04％是适宜的培养基成分，在 mL，接种量10％的条件下，48h可将10 pH7．O，37℃，50删L／250 m舢甜菊糖溶 液中的甜菊苷(7．2mg／mL)完全转化。 该菌所产酶为胞内酶，采用高压破壁，在45℃，pH值7．O，底物浓度10m幽nL 的条件下，12 h甜菊苷的转化率为95％，15h可完全转化。用不同的表面活性剂对 h转化率为74％，1mon-100添加2％，12h转化率达到100％。 以海藻酸钠为包埋材料，对黄杆菌胞内酶进行固定化，在海藻酸钠浓度4％， 氯化钙浓度2％， 经2 mLl％甜菊糖溶液 h的固定化，然后在45℃，pH7．0，在10 中添加15 g固定化酶，固定化酶可重复利用3次，转化效率保持在80％以上。 用大孔树脂对RS进行分离纯化，研究表明，1体积的cN．308树脂可以完全吸 乙醇作为洗脱剂，洗脱液体积为1．5BV时，RS纯度为96％． 关键词：甜菊苷，黄杆菌，甜茶苷，生物转化，胞内酶 r Abs仃act Abstract SteViol maillsweet iIltheleavesof8v妇旭6口“托加 91ycosides，t11eingredien：ts twDsweet rebaudioside (BertoIli)，Im，e componentsste、rioside(SS)a11dA∞～)． mainsweet iIl也e1eaVesof R1lbusoside，thein孕edient R动淞s“口v话sf册惦讹Chis becallseof也e1砌t撕onof ConditioIls．111is alpilleplant，l瑚low舛eld geo伊aphical workcould anewmetllodt0obtam proVide bio臼瑚1sfoma：tion，meref．orc ofR幻淞s“口1，五鼯fm螂． reducillg也eplan血19 7111ebacilhls也at Couldconvertstevioside wausiden：ci丘edonale