生死细胞突变在巴细胞中功能检测模型的建立、分析和应用.pdfVIP

摘要 小鼠突变品系在近年来的快速积累为以表型分析为基础的遗传筛选提供了珍贵 的资源。然而，如果纯合突变基因导致小鼠在胚胎发育早期产生缺陷，往往会不同程 度地阻碍了我们在成熟体细胞中研究该基因的功能，例如成熟小鼠的淋巴细胞。这里 我们建立了两种新的有丝分裂重组模型，它们都能够在一定程度上帮助我们在淋巴细 胞中检测生殖细胞突变产生的表型和进行功能研究。 一种方法是通过染色体删除在发育中的淋巴细胞内诱导杂合性缺失。在细胞有丝 生的子细胞将丢失全部或者部分的重组染色体。通过实验我们证明，这样的子细胞是 能够存活的，而且可以进行多次的细胞分裂。这些细胞为接下来的表型分析提供了研 究对象。我们利用这个重组模型在B淋巴细胞发育早期诱导了E2A基因的杂合性缺 失。我们观察到，通过染色体删除，当在E2A杂合突变背景的小鼠中移除野生型的 E2A等位基因时，祖B淋巴细胞和前B淋巴细胞数目都明显减少。实验结果与已知的 E2A基因在B淋巴细胞早期发育中的功能一致。我们还利用相同的模型高效率诱导了 HEB基因的杂合性缺失，以检测该基因在T细胞发育中的功能。我们的研究结果显示， 在淋巴系统中，Cre介导的高效率染色体删除，为在全基因组范围内研究生殖细胞突 变提供了崭新的思路和便捷的手段。 另一种方法是在细胞有丝分裂期间，通过诱导l号染色体同源重组，产生镶嵌型 重组，并在杂合的遗传背景上产生纯合细胞克隆。我们利用1号染色体同源重组模型 分析了DHX9在T淋巴细胞发育中的功能。通过镶嵌体分析，我们发现在胸腺和外周 有一定的影响。 关键词： 反向姐妹染色单体重组，染色体删除，杂合性缺失，E2A，HEB，同源重组，DHX9 中图分类号：Q3 Abstract ofmutantmousestrainsinrecent has aninvaluable Thefastaccumulation yearsprovided resourcefor of phenotypes phenotype-basedgeneticscreens．However,studylymphoid canbeobscuredor if mutationscause defects． embryonic impracticalhomozygous early we twomitoticrecombinationtoaid of Here screening developed systemsphenotype germ inthe tissues． linemutations lymphoid methodtoinducelossof One is heterozygosity(LOH)indevelopinglymphocytes deletion．Chromosomedeletionwas chromosome triggeredby through intheG2／M thecell tothe inversesisterchromatidrecombination of phase cycle，leading of cells