砂仁活性物质对氨酸酶抑制作用机理的研究.pdfVIP

砂f-活性物质对酪氨酸酶抑制作用机理的研究 摘要 酪氨酸酶(EC．1．14．18．1)是一种多亚基的含铜氧化还原酶，广泛存在于自然界中， 其异常表达可引起各种各样的病变，如老年斑、雀斑、光照损伤、果蔬褐变及与人脑 中的神经黑色素形成及神经退行性病变相关的帕金森病等。 砂仁为历代常用中药，是四大南药之一，在治疗胃肠道疾病中应用普遍，现代临 床还用于对妇产科疾病、心力衰竭和抗肿瘤等方面的医疗，而其作用于酪氨酸酶的研 究鲜有报道。本论文以砂仁为研究对象，经分级萃取得到五相萃取物，测定提取物对 酪氨酸酶单酚酶和二酚酶的抑制作用机理。检测了砂仁提取物对DPPH自由基、羟基 自由基和超氧阴离子自由基的清除能力及总还原力，同时研究了提取物对细菌的抑制 作用。以小鼠B16黑色素瘤细胞为研究对象，研究了提取的效应物对细胞增殖率、酪 氨酸酶活性、黑色素含量的影响，并对其活性成分进行分析鉴定。本文研究结果和内 容如下： (1)本文运用超声提取，分级萃取，大孔树脂AB．8及HPLC等分离纯化手段，以酪 氨酸酶抑制活性为指标，对砂仁提取物活性成分进行了追踪分离，最终通过比较分析 推测有效成分可能含有槲皮苷和异槲皮苷。 ． (2)对砂仁各提取物进行酪氨酸酶抑制活性实验，结果表明各提取物对酪氨酸酶二酚 酶呈现不同程度的抑制作用，部分提取物对单酚酶也有较强抑制活性。同时深入研究 探讨了效应物对蘑菇酪氨酸酶二酚酶的抑制机理和抑制类型，测定了相关抑制常数。 (3)选择了砂仁各提取物作为效应物，研究其清除DPPH自由基、羟基自由基和超氧 阴离子自由基的能力，并测定了各效应物的总还原力。进一步验证天然活性物质与酪 氨酸酶的结合方式，为确定天然活性物质的作用机理奠定基础。 (4)研究了砂仁提取物对细菌的抑制效果，探讨酪氨酸酶抑制剂与抗菌之间的联系， 为进一步揭示酪氨酸酶在细菌生长中的作用提供支持。 (5)研究了砂仁中酪氨酸酶天然抑制剂对小鼠黑色素瘤B16细胞的药效学效果，通过 加药后细胞增值率、酪氨酸酶活性和黑色素含量等指标的变化，确定筛选出的天然活 性成分的毒性、抑制酶活力效果、抑制黑色素合成能力以及分解黑色素能力等机制， 从而为酪氨酸酶抑制剂的应用提供理论支持。 关键词：砂仁；酪氨酸酶；B16细胞；生物学效应 砂仁活性物质对酪氨酸酶抑制作用机理的研究 Abstract 1．14．1 a redoxidase multi-subunitof 8．1)is containingcopper,widely Tyrosinase(EC distributedinnature．Itsabnormal isresultsinthevarious as expression disease，such melasama infruitsand also agespots，freckle，actinicdamages，browningvegetables．It contributestoneuromelaninformationinthehumanbrainandthe neurodegeneration associatedwithParkinson’sdisease． It usedtotreat fortreamentof diseases，also commonly gastrointestinal apply obstetricsand failureandanti-tumorandother inmodem