砷对卵巢颗粒细孕酮分泌的影响及分子机制研究.pdf

砷对卵巢颗粒细胞孕酮分泌的影响及机制的研究 摘要 砷污染严重威胁着人类的生活环境和健康，流行病学研究表明砷暴露和多种 疾病相关，如砷可以导致皮肤病、糖尿病、高血压，引起基底细胞癌、鳞状细胞 癌等。以往的研究报道砷可以引起激素介导的基因表达异常，然而砷对性甾体激 素分泌的研究相对还比较少。 首先我们以21天雌性SD大鼠原代卵巢颗粒细胞为模型，用不同浓度的亚 砷酸钠进行处理，发现砷可以明显促进卵巢颗粒细胞分泌孕酮。我们进一步分析 了砷对21天雌性SD大鼠甾体激素分泌的影响。给予SD大鼠10 m扎砷饮水七 天，应用放射性免疫的方法检测血清中孕酮、雌二醇和睾酮含量，结果发现砷同 样可以引起大鼠孕酮分泌显著增加，而对雌二醇及睾酮分泌影响不明显。 近年来的研究显示在促性腺激素LH(Luteinizing stimulating 粒细胞孕酮合成的过程中具有重要的作用。在促性腺激素的作用下，细胞内 cA御升高，激活PKA，磷酸化ERKl／2，进一步激活特异转录因子引起甾体激 素生成相关蛋白的转录。cAMP／PKA及ERKl／2信号转导通路是否参与调控亚砷 酸钠诱导的孕酮分泌过程呢?我们用化学发光法和Westemblot技术分别检测了 砷暴露后颗粒细胞内cAMP的水平以及ERKl／2磷酸化的水平，结果显示亚砷酸 钠并没有改变颗粒细胞内cAMP及ERKl／2磷酸化的水平，说明亚砷酸钠诱导孕 酮分泌并不依赖于细胞内cAMP及ERKl／2磷酸化水平的改变。而且不同剂量的 亚砷酸钠也没有明显改变cAMP／PKA和ERKl／2调控的下游甾体激素生成相关 特异性抑制剂U01 26处理颗粒细胞后，结果发现PKA和ERKl／2的抑制剂能有 效抑制本底水平和亚砷酸钠刺激的孕酮分泌。说明亚砷酸钠诱导孕酮分泌不依赖 ERKl／2信号转导通路来维持孕酮的分泌。 孕酮分泌是卵巢颗粒细胞分化的标志之一。许多研究表明砷具有激活 胞分化?我们的研究结果显示亚砷酸钠诱导卵巢颗粒细胞caspase．3的剪切和激 制剂既能显著抑制亚砷酸钠刺激的孕酮分泌也能抑制本底水平的孕酮分泌。随 4 后，我们发现caspase．3siRNA敲低caspase．3基因的表达同样抑制了亚砷酸钠诱 导的孕酮分泌。这表明砷诱导的孕酮分泌依赖caspase一3的激活。 用不同浓度的亚砷酸钠处理颗粒细胞激活了caspase．3，刺激了孕酮分泌， 但是流式细胞技术检测表明砷并没有引起细胞的凋亡。进一步结果表明砷作为一 种氧化剂不仅没有诱导ROS(reactive oxygenspecies)的产生，反而改善了细胞 内的氧化还原状态，降低了细胞内ROS的水平，升高了细胞内还原性谷胱甘 肽(GsH，ReducedGlutathione)。伴随着孕酮分泌，亚砷酸钠处理的颗粒细胞膜 电位也呈现剂量依赖性升高。而孕酮的拮抗剂米非司酮可以抑制亚砷酸钠刺激 GSH的合成，提示亚砷酸钠对颗粒细胞内氧化还原环境的改善部分依赖于孕酮 的产生。进一步我们发现GSH合成抑制剂BS0(buthioninesulfoximine)诱导了 亚砷酸钠处理的颗粒细胞发生凋亡，这表明GSH在维持细胞氧化还原微环境和 对抗细胞凋亡中起着重要的作用。 综上所述，我们首次发现砷可以在体内外引起孕酮的升高，而且我们揭示了 砷诱导孕酮的分泌依赖于caspase一3的激活。伴随着孕酮的产生，GSH的合成增 加，而GSH含量的增加对抗了颗粒细胞的凋亡，进而维持亚砷酸钠诱导的孕酮 的分泌。 关键词：亚砷酸钠；甾体激素；孕酮；颗粒细胞；caspase-3；膜电位；GsH 5 Abstract Arsenic—Induced Productionina Progesterone Caspase．3 Mannerand Redox Dependent