重组人ICOS外区原核表达载体的构建及表达.pdfVIP

摘要 摘 要 本实验构建了重组人ICOS胞外区的原核表达载体，进行了重组ICOS蛋 白的表达与纯化，并将其作为抗原免疫小鼠。根据GenBank基因库中ICOS胞 中扩增出ICOS胞外区单链基因，并运用重叠延伸PCR技术扩增出ICOS胞 外区双链基因，将ICOS胞外区双链基因插入到原核表达载体pET．28a中，对 重组质粒进行鉴定。转化E．coli BL21(DE3)，IPTO诱导表达目的蛋白。通过包 涵体变复性纯化目的蛋白，并通过Western blot鉴定目的蛋白。后将目的蛋白 作为抗原免疫小鼠。结果获得ICOS双链基因大小为757 bp，构建的重组表达 blot鉴定表明目的蛋白在E．coli BL21(DE3)中高效表达，相对分子质量约为31 KD，与预期结果相符。免疫小鼠后得到较高的抗血清效价。检测结果表明：成 功地构建人重组ICOS胞外区的原核表