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.论著.
RNA同时干扰四个不同基因对鼻咽癌
细胞CNE一2Z生长增殖的实验研究
宋英董明敏杨海峰
【摘要】 目的应用RNA干扰技术构建一个载体同时编码四个基因,即血管内皮生长因子
(VEGF)、致癌基因蛋白(c.myc)、存活素(survivin)和端粒酶反转录酶的短发夹重组质粒,并与单基因
质粒做对比,通过体内外实验,研究其对鼻咽癌细胞CNE-2Z生长增殖的影响。方法构建同时表达
VEGF、C-myc、survivin和端粒酶反转录酶并含荧光索标记的短发夹RNA质粒命名为P.1,并构建单独
表达VEGF、c—myc、survivin和端粒酶反转录酶的质粒,分别命名为P_2、P-3、P-4和P-5,分别将其将转
染人鼻咽癌CNE-2Z细胞株及荷瘤裸鼠瘤体内。以激光共聚焦显微镜观察质粒在CNE-2Z细胞及瘤
体内的转染及表达情况。四甲基偶氮噻唑蓝法检测细胞增殖活性,实时PCR在mRNA水平上检测对
目的基因表达的抑制作用,免疫印迹法在蛋白水平上检测对目的基因的封闭效果,Transwell侵袭小
室模型观察导入CNE-2Z细胞对其恶性生物学行为的改变,流式细胞仪观察各组凋亡率,体内裸鼠成
瘤实验观察质粒对肿瘤的抑制效果。结果多基因干扰质粒转染鼻咽癌细胞后,CNE-2Z细胞增殖受
到明显抑制,体外侵袭能力显著下降(P值均0.05)。实时PCR证实多基因组4个不同基因mRNA
表达均降低,免疫印迹技术验证目的基因蛋白同时表达下调。流式细胞仪结果证明多基因凋亡率明
显高于单基因组(P值均0.05)。体内抑瘤实验表明,与阴性组和空白组相比,P-1组移植瘤生长明
显受到抑制(PO.05),并且多基因质粒抑制肿瘤细胞增长的作用要强于单基因干扰质粒(P值均
0.05)。结论同时干扰多个基因能有效抑制鼻咽癌细胞增殖并诱导其凋亡,为鼻咽癌基因治疗奠
定了良好的实验基础。
【关键词】RNA干扰;基因疗法;鼻咽肿瘤;细胞系,肿瘤;细胞增殖
EffectsofRNAinterferencefourdifferentOHthe and of
targeting genes growthproliferation
carcinomaCNE-2Zcells SONG
nasopharyngeal H昭,DON6胁ng—miraDepartmentof
First of 450052,China
Otorhinolaryngology,theAffiliatedHospitalZhengzhouUniversity,Zhengzhou
Correspondingauth07:DDⅣcMing—min,Email:dmment@163.com
the of
To effectsRNA fourdifferent
【Abstmct】0bjectlveexplore interference(RNAi)targeting
the and of carcinoma
genes(VEGF,c—myc,survivin,hTERT)ongrowthproliferationnasopharyngeal
cells.MethodsPlasmid-1allfour and5
(NPC)CNE-2Z targeted genes,plasmid-2,3,4targetedVEGF,
andh‘rERT weretransfected
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