人胰高血糖素样-1类似物基因真核表达载体构建及生物学功能分析.pdfVIP

人胰高血糖素样肽．1类似物基因真核表达载体构建 及生物学功能分析 中文摘要 【目的】 人胰高血糖素样肽．1(buman酉ucag伽-1ikep印tide一1，hGLP-1)是一种由30 个氨基酸残基组成的肠促胰岛素激素，主要由肠道L细胞分泌，具有促进胰岛 素分泌、降低血糖的作用。同时，对胰岛p细胞的分化、增殖也起重要作用，包 括抑制D细胞凋亡。本课题组通过前期研究，已建立了一整套采用基因工程方法 制备重组hGLP．1的技术路线，获得了具有生物学活性的重组hGLP．1产物。但 由于其较短的生物半衰期及多肽药物口服给药的限制，本实验研究拟构建一种新 型hGLP．1类似物基因，并将该基因克隆入真核表达载体，通过体内外实验研究 其在糖尿病治疗中的作用，为hGLP．1用于糖尿病基因治疗提供实验资料。 【方法】 1．采用固相亚磷酸三酯法分段合成hGLP．1类似物基因片段，退火拼接成 完整的2×Val2-hGLP．1类似物基因，插入pBSSK(+／-)克隆载体，构建重组质粒 pBS HEK．293细胞，Westem 导凋亡的p．TC．6胰岛瘤细胞株，通过wST．1实验和Hochest染色初步观察其对 胰岛细胞凋亡的影响。 4．腹腔注射STZ制备糖尿病大鼠模型，通过尾静脉注射pIRES2。EGFP／2× Val2-hGLP．1重组表达载体，分析其对糖尿病大鼠的干预作用。 【结果】 1．构建的pBS 体中。 2．W色stem 明pIRES2．EGFP／2×val2-hGLP．1基因转染对胰岛瘤细胞凋亡具有抑制作用。 Val2．hGLP．1重组载体后，免疫组化证实hGLP．1类似物在大鼠体内成功表达， 并随血流输送至靶器官发挥作用，糖尿病大鼠的生活状态、饮水、进食量、体重、 血糖、血清胰岛素、总胆固醇水平明显改善，糖耐量提高。HE染色发现胰岛病 理状况明显改善，免疫组化观察发现胰岛素分泌颗粒增多。 【结论】 blotting证 在AxN诱导凋亡的p．TC一6细胞株中发挥抑凋亡作用。hGLP．1类似物基因转染 对糖尿病大鼠的机体代谢具有良好的调节作用，缓解了糖尿病大鼠的代谢症状， 而且糖尿病大鼠的胰岛素分泌增加、胰岛p细胞增殖。 【关键词】人胰高血糖素样肽．1类似物基因；载体构建；糖尿病大鼠模型； 血糖；胰岛素；基因治疗 2 Vector Constructionofeukaryotic ofhuman expression and ofits glucagon—likepeptide一1analoggene analysis function biological 【Objective】 Human a30amino—acid thatis glucagon-likepeptide一1(hGLP-1)ispeptide secretedf}omt11eL-cellsoftheinteStineand an role0n playimponalltdecreasjng insulinsecretion．hGLP-1hasalsobeen glucosethroughstimulatingglucose-induced shownto tostimulatebeta-ceU aIld beta-ceU如nction，and preserve