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甲壳素衍生物的免疫调节及抑瘤作用的研究 摘要 cell 肾细胞癌(renalcarcinoma，RCC)简称肾癌，起源于肾实质层泌尿 小管上皮系统的泌尿系统中常见的恶性肿瘤之一。肾癌对传统的放化疗均不敏 感。生物治疗技术是通过提高机体自身的免疫能力，实现患者自身机体的“自 主抗癌”，成为肿瘤治疗领域最受关注的焦点之一。甲壳素和壳聚糖作为研发 阶段的生物治疗制剂，近年来愈来愈备受关注。 聚乙酰氨基葡萄糖。甲壳素和壳聚糖经羧基化反应后可分别制得羧甲基甲壳素 (CM—CT)和羧甲基壳聚糖(CM-CTS)；甲壳素和壳聚糖经水解后可分别制得N． 乙酰氨基葡萄糖(NAG)和壳寡糖(COS)。甲壳素和壳聚糖的各种衍生物均 具有良好的水溶性和生物活性，可被机体降解吸收，因而在医药、生物材料、 食品等领域得到广泛的研究和应用。甲壳素和壳聚糖对肾癌的影响目前鲜有报 道；对机体单核细胞(PBMCs)的影响目前也未见报道。在抗肿瘤的免疫应答 中，细胞免疫起主要作用。参与细胞免疫的细胞主要是单核细胞(PBMCs)，包 括：T淋巴细胞、NK细胞、单核巨噬细胞等。若能促进单核细胞的增殖与分化， 必将促进机体的免疫及抗肿瘤作用。 察加糖前后对体外培养的人外周血单核细胞(PBMCs)的增殖分化、凋亡及分 泌细胞因子等的影响，进而探讨对机体的免疫系统的影响；同时体内外培养肾 肿瘤细胞OS—RC一2，观察糖衍生物对小鼠免疫系统的影响及对肾肿瘤细胞及组 织的抑瘤效果及作用机制。主要应用MTT法、AO．EB染色、流式细胞术、Elisa 酶联免疫法、RT-PCR和免疫组化、电镜观察等方法和技术探讨了甲壳素衍生 物的作用及作用机制。 甲壳素衍生物体外培养人外周血PBMCs，MTT和AO／EB结果显示，中、 低剂量组的CM．CTS、CM．CT可明显促进其增殖并抑制其凋亡，而COS和NAG III 里嚣丞堑垡塑数鱼堰遢歪丛理擅侄旦盟鲤荭 在中、高剂量组效果显著(P0．05)。流式细胞仪结果显示，CM．CT主要使 COS和NAG两剂量组可使PBMCs 有促进作用，最佳作用剂量为100pg／ml； 和IL．2因子的分泌(PO．01)，而NAG在500 J_tg／ml、30099／ml时作用效果显 著(P0．01)。 体外培养人肾肿瘤细胞OS．RC一2，观察甲壳素衍生物对其影响。MTT和 AO．EB结果显示，中、低剂量组的CM．CTS、CM—CT和中、高剂量组的COS 和NAG可抑制肾肿瘤细胞OS．RC．2的增殖并促进其凋亡(P0．05)。流式细 胞术结果显示，中、低剂量组的CM．CTS、CM—CT及中、高剂量组的COS和 NAG均可使滞留在Go／G1期的癌细胞显著提高，使滞留在S期和G2／M期的癌 细胞显著降低，从而阻断癌细胞DNA的合成，导致其凋亡。 体内实验结果显示，甲壳素衍生物小鼠灌胃15天后，各实验组中小鼠的体重、 胸腺和脾脏指标及抑瘤率均有变化，中、低剂量组的CM．CTS、CM．CT及以及中 高剂量组的COS和NAG在有效抑瘤的同时，还对免疫器官起到有效的保护作用。 用剂量为100 mg／kg，抑瘤率为50．78％+1．03％；而COS的最佳作用剂量为100 meCkg，抑瘤率为53．540／社1．11％；NAG贝IJ在500mg／l(g时抑瘤效果最好，抑瘤率 mg／l【g时 可明显抑制瘤细胞OS．RC一2VEGFrnRNA及其蛋白的表达，CM．CT的最佳作用剂 量为100 mgg，而COS和NAG则在300mgg时抑制效果明显(P0．01)。透射电 镜结果显示，四种甲壳素衍生物均可引起肿瘤细胞超微结构的改变，其中CM。CT 组和NAG组可见明显的核染色质固缩及细胞器结构的改变。小鼠NK细胞杀伤率 及血清中IFN—Y及IL一2含量测定结果表明，中、低剂量组的CM—CTS、CM—CT、 IV 空盘塞堑生物鲍鱼壅翊堇区麴擅往旦鳆鲤窥 COS及高、