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硝苯地平对人牙龈上皮细胞增殖和凋亡的影响 摘 要 药物性牙龈增生（Drug-induced gingival overgrowth ，DGO ）是服用 某种药物后产生的以牙龈上皮层增厚和上皮下结缔组织大量基质堆积为 显著病理特征的牙周疾病。硝苯地平（Nifedipine ，NIF ）导致牙龈上皮 层增厚的机制目前尚不清楚。有研究显示，在硝苯地平介导的DGO 中， 细胞周期的失衡及细胞凋亡的抑制可能与疾病发生机制相关; 与凋亡相 关的调节基因 bcl-2 在抑制人牙龈上皮细胞(Human gingival epithelial cells, HGECs) 凋亡过程中可能起重要作用。但是，在细胞水平上硝苯地 平对HGECs 增殖和凋亡以及bcl-2 基因表达的确切影响尚不清楚。 目的 本研究拟检测 HGECs 在不同NIF 浓度刺激下细胞增殖、细 胞周期、细胞凋亡情况及 bcl-2 基因表达水平，并探讨这些改变在 NIF 诱导药物性牙龈增生发生发展中的作用，以初步探讨药物性牙龈增生发 生发展的机制。 方法 1．采用酶消化培养法体外分离培养HGECs ；检测CK 蛋白和波形 丝蛋白的表达，以确定其生物学来源，并采用MTT 法观察HGECs 的体 外生长生物学特性。 2 ．采用MTT 法分别检测HGECs 在0 μg/ml, 1 μg/ml, 2 μg/ml, 3 μ g/ml 浓度的NIF 刺激下细胞的增殖情况。 3 ．采用Real-time PCR 技术检测HGECs 在0 μg/ml, 1 μg/ml, 2 μg/ml, 3 μg/ml 浓度 NIF 刺激下 bcl-2 基因表达水平的差异，探讨药物刺激对 bcl-2 基因表达的影响。 4 ．采用流式细胞术分别检测HGECs 在0 μg/ml, 1 μg/ml, 2 μg/ml, 3 μg/ml 浓度的NIF 刺激下细胞周期和细胞凋亡水平的变化，以探讨NIF 对HGECs 细胞周期和细胞凋亡的影响。 结果 1．采用酶消化培养法分离培养的HGECs CK 蛋白表达阳性，表明 属于外胚层来源的细胞，该细胞在体外增殖能力稳定、良好。 2 ．不同浓度NIF 刺激8d，各组HGECs 细胞增殖能力无显著性差异 (P ＞0.05) 。 3 ．Real-time PCR 的检测结果显示：1 μg/ml、2µg/ml 、3µg/ml NIF 刺激HGECs 24h 后，bcl-2 mRNA 表达水平比0 μg/ml 浓度组分别增高了 5.34 倍，6.53 倍，12.89 倍(P＜0.05) ；1 μg/ml 、2µg/ml 、3µg/ml NIF 刺激 HGCEs 48h 后，bcl-2 mRNA 表达水平比0 μg/ml 浓度组分别增高了1.18 倍，2.42 倍(P＜0.01) ，1.90 倍(P＜0.05) 。 4 ．流式细胞术PI 法检测结果显示，24h 各NIF 浓度组细胞周期分 布及细胞凋亡百分比未见显著性差异（P ＞0.05 ），48h 各NIF 浓度组细胞 周期分布及细胞凋亡百分比未见显著性差异（P ＞0.05 ）。 结论 本研究将细胞周期、细胞凋亡和细胞水平bcl-2 基因表达的检 测引入硝苯地平诱导药物性牙龈增生的机制研究，初步探讨硝苯地平诱 导药物性牙龈增生的发病机理。研究结果显示，三种浓度 NIF 作用 8d 对体外培养 HGECs 的细胞增殖无明显促进作用; NIF 可以诱导 HGECs 增强表达bcl-2 基因，但是48h 内NIF 未显示出对HGECs 细胞周期和细 胞凋亡的显著性影响。 本研究首次将三种浓度的 NIF 浓度(1µg/ml, 2µg/ml, 3µg/ml) 引入 HGECs 关于药物性牙龈增生的研究，模拟口腔中NIF 持续较高浓度环境， 为后续研究提供实验数据。 关键词 药物性牙龈增生，硝苯地平，人牙龈上皮细胞，细胞增殖，