紫杉醇侧链合成基因侧翼序列克隆与生物信息学分析.pdf

摘要 紫杉醇是从红豆杉属植物中提取的一种具有高效抗肿瘤活性的药物，因其独 特的抗癌机理成为新一代抗癌药物的代表。但紫杉醇的化学合成方法效率低，天 然提取紫杉醇的资源受限。生物合成紫杉醇成为一种有潜力的方法，但还有数个 基因未克隆和鉴定。本文针对紫杉醇侧链生物合成的3个基因：氨基变位酶 体分布，展开研究。 通过同源克隆得到东北红豆杉侧链合成酶PAM、BAPT、DBn喝T的部分基 因序列，利用热不对称交错PCR方法，分别向3个基因的上下游扩增侧翼序列， 及其上下游共4．3kb。 生物信息学分析表明PAM基因含有2个外显子和1个内含子，ORF长 181 约158bp。 对紫杉醇合成途径中的46个基因的碱基组成分析，表明G／C含量较低 (43．4％)。密码子偏爱性分析，发现紫杉醇生物合酶编码氨基酸Ala、Asp、Phe、 Gly、His、Asn、A唱、T协、T姐的密码子具有明显的偏爱性，它们均偏爱使用 含有A厂r的密码子，同时出现频率较高的密码子也多含有朋，这与紫杉醇合成 基因们含量高是一致的。 以上对紫杉醇侧链合成途径3个酶基因的初步认识和紫杉醇合成途径密码子 偏爱性的初步研究，为以后深入研究紫杉醇侧链生物合成奠定了一定基础。 关键词： 红豆杉：紫杉醇侧链生物合成；热不对称交错PcR；密码子偏爱 ABSTRACT TaXol，exn．acted讯)moneofthe t；aXus，is most natural锄ti．cancer important 0fits dmgs．Bacause unique锄ti-cancermechanism，ta)【olhasbecomethe ofanew representatiVe ofanti-cancer generation chemical of dmgs．But synthesis 伽(olis ine简cient锄dthe extraction舶mwillbe a、vaSteof pl锄t resources．So oftaxolhasbecome biosynthesis themost afew promisingmethod，butbiosVnthesis —．ralated haVenotheen genes cloned．Inthis the chromosome paper，we锄alyzed diStmuionofthree genes(PAM，BAPT，DBTNBT)whichinvolvedinta)【olside．chain biosynthesis． We haveclonedthree andtheir genes naIlking sequencesbyhomolog)r cloning 锄dthemal interlaced aSymmetricPCR．Noww