小油桐开花控制因fttfl1的克隆及功能初步分析.pdfVIP

小油桐开花控制基因门玎兀，的克隆及功能初步分析 小油桐开花控制基因厂槐7的克隆 及功能初步分析 专业： 生物化学与分子生物学 硕士生：罗莉 导师： 徐增富教授 中文摘要 FT(flowering 酰乙醇胺结合蛋I刍(phosphatidylethanolamine-bindingprotein，PEBP)I拘基因，在很 多植物中被证明参与光周期调控植物开花的过程。但是在木本植物中这类基因的 curca$L．)，属于大戟科的多年生 研究还较少。本研究的材料小油桐(Jatropha 灌木或小乔木，是一种被广泛认可的优良能源植物树种。但是目前由于小油桐花 期不集中、雌花比例较少以及营养生长期时间较长，导致其产量还不能满足快速 发展的生物柴油产业的需求，所以如何提高小油桐的产量是亟待解决的问题。本 研究旨在通过研究小油桐开花控制基因门玎咒，的功能，明确小油桐的开花机 理，以期找到调控小油桐开花习性的关键基因，为进一步的遗传改良和优良品种 培育奠定基础。同时，也为木本植物开花的分子调控机制的研究提供新的实验数 据。 本研究通过对已克隆的双子叶植物中的同僦，家族基因序列进行比对， chain 在同源性较高的序列区域设计简并引物，利用聚合酶链式反应(polymerase cDNA of ends， 小油桐开花控制基因FT／TFLl的克隆及功能初步分析 RACE)和染色体步移技术(genome 的5个成员，分别命名为JcMFT(mother ofFTand dcTFL3。通过BLAST分析发现小油桐门玎兕J基因家族中的5个成员与其他植 物的FT／TFLl基因家族成员的序列同源性可高达79％～90％。基因结构分析表明 5个基因结构较保守，都具有4个外显子和3个内含子，并且中间两个内含子的 碱基数目很保守，分别为41bp和62bp，这与其它研究报道相符。对这5个基因 的推导氨基酸序列进行比对发现，它们相互间同源性较高，其中JcTFLl与JcTFL2 同源性最高，可达77％。系统进化树分析结果显示，JcFT／TFLl分属于3个亚类， 于TFL．亚类。同时，将推导的氨基酸序列与拟南芥FT／TFLl序列进行比较，结 果表明拟南芥FT-亚类、TFL．亚类和MFT-亚类中对功能起关键作用的保守氨基 酸位点或区域在小油桐FT／TFLl中都能对应地找到。 为了研究JcFT／TFLl基因家族在小油桐中的功能，我们分别分析了这5个基 因的时空表达模式。取幼苗植株、成年植株开花前期、开花期以及结果期的小油 桐不同组织器官为材料，通过半定量反转录RCR(reverse transcription PCR，ImPCR)方法分析了不同基因在不同发育阶段以及不同组织中的表达情况。 结果显示，JcMFT主要在种子中表达，少量在根中表达；比刀除了在成年植株 开花前期中无表达外，在其它发育阶段植株的各个组织中都有表达，并且在结果 期植株的茎顶端中达到最高表达量：JcTFLl和JcTFL3主要在幼苗和未开花植 株中的根中表达，其它组织中几乎没有表达；JcTFL2的表达组织与如刀类似， 其最高表达量也出现在结果期植株的茎顶端中。同时，本研究通过染色体步移方 法克隆出了JcMFT的启动子序列，对其启动子序列中顺式作用元件分析发现， 2 小油桐开花控制基因冈玎R，，的克隆及功能初步分析 该启动子中含有种子特异性表达元件RY