小麦内生蜡样芽杆菌0-9产芽孢变异突变体筛选.pdf

摘要 蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)O一9是一株从健康小麦植株中分离获得内生细菌，室 内试验和大田试验均显示出该细菌能够在小麦根际稳定定殖，具有生物薄膜形成能力， ofwheat)具有良好的生防效果。芽孢杆菌的个体生长发育 对小麦纹枯病(sharpeyespot 到一定阶段启动特定的代谢过程，细胞停止正常的生长和分裂，细胞内胞质浓缩，在细 胞内形成一个壁厚、含水量极低、抗逆性极强的芽孢，对高温、干燥、辐射、化学药物 和静水压等都有极强的抵抗能力。这一特性有利于生物制剂的生产、剂型／jn-r及在环境 中存活、定殖与繁殖。因此，本研究目的是通过应用分子生物学技术，筛选出生防菌株 0-9芽孢形成变异菌株，分离芽孢形成相关基因，为进一步生物制剂的研究开发奠定基 础。 TnYLB．J转座插入到0-9的基因组上，根据对不同高温诱导转座条件的比较，确认最佳转 座条件为：46C处理10h，此条件下，转座效率可达90．38％。成功构建了含有1163株突 变株的突变体库。 ’ 应用芽孢染色和芽孢形成率测定的方法，通过测定出发菌株0-9芽孢形成动态，阐 培养26h取样有利于芽孢形成变异突变体的筛选条件。在此基础上，通过芽孢染色和高 温平板对比筛选相结合的方法，从含1163株突变株的突变体库中初步筛选出了4株芽 发生突变的频率为0．43％。 利用反向PCR技术，对B2突变株的转座子插入位点侧翼序列进行克隆和序列分析， 通过同源性比对，发现转座子TnYLB．J插入到NADH脱氢酶(NADH 的编码基因，推测NADH脱氢酶可能参与芽孢的形成，该研究结果尚未见报道。本研 究为进一步研究芽孢形成的调控机制以及芽孢形成与0-9菌株对于小麦纹枯病生物防治 的分子机制奠定了基础。 关键词：转座插入，突变体库，芽孢形成，NADH脱氢酶 n ABSTRACT Bacillus bacteria ce麟0-9。allendophyticisolatedfromrootsof wheatin healthy previousstudy, couldcolonizeinner and of roots wheat biofilmandhad to rhizosphcrepersistently,form potential control ofwheat biologicalagainstsharpeyespot underroomandfield formationis conditions．Endospore alackofnutrientsand Cansurviveenviromentalassaults usuallytriggeredby endospores thatwould kill thebacterium．Thesestressesinclude UV normally hightemperature，high chemical and destruction．Thisfeatureof contributesittoformulation damageenzymatic endospore for control ofthis wastoisolated pro