小麦铁超氧化物化酶(fesod)基因的克隆和表达功能分析.pdf

摘要 植物在生长发育的过程中会受到各种各样的逆境胁迫，产生对植物体有害的自由 基。当下，通过分子生物学等技术手段从植物中分离抗逆基因，并转入到农作物中进 行表达，是培育抗逆高产品种，提高作物产量的重要手段。超氧化物歧化酶(SOD) 是清除植物体内活性氧的一种重要抗氧化酶类。研究发现，植物体内SOD酶活性的 高低和植物的抗逆性密切相关，而且过表达SOD基因能明显提高植物对盐胁迫的抵 御能力。本论文选取小麦烟农19为材料，采用RACE技术克隆出小麦FeSOD基因， 并进行序列分析；构建原核表达载体，在大肠杆菌中表达，并优化了诱导表达条件； 用荧光定量PCR技术分析该基因在不同逆境胁迫下的表达差异。 研究结果如下： 稻等物种具有高度的同源性。 2．根据获得FeSOD基因序列设计引物扩增编码区，并在引物上引入NotI和 Rosetta Blot成功检测到重组蛋白，目的蛋白成功表达。通过优化IPTG浓度、诱导时间和诱 导温度确定重组菌最佳诱导表达条件为0．5mmol／L的IPTG，诱导5小时，37。C。 3．通过荧光定量技术，分析小麦FeSOD基因不同逆境胁迫下的表达差异。结果 表明：在逆境胁迫下，FeSOD基因的表达量大体呈现先上升后下降的趋势。在37℃ ABA 分别为对照的34倍、4．5倍、4．3倍、5．8倍、13．5倍和3．3倍，均达到显著水平。 关键词：小麦，铁超氧化物歧化酶，克隆，原核表达，荧光定量 万方数据 Abstract Plantswill harmfulfreeradicals many inthe of and produce processplantgrowth whena ofenvironmentalstress to developmentvariety subjectplant．At new varietiesresistanttostress defense crop byisolatingplant genes through methodsandthen it in becomean biotechnology lertingexpresstransgenicplants，has effectivetoincrease an way cropyield．Superoxidedismutase(SOD)is important antioxidantwhichCanclearreactive in aresome enzyme oxygenspecies plant．There that studies SOD levelin Was relatedto stress fmding activity plantsclosely plant to