根瘤菌ngr24的一种ⅲ型效应因子nopp的功能研究.pdf

姓名：金诚 专业：植物学 导师：ChristianStaehelin 摘要 根瘤菌NGR234能够与多种豆科植物通过形成固氮根瘤而建立共生关系。有些 宿主植物对根瘤菌分泌的III型效应因子产生阳性的反应(如大叶千斤拔和非洲山 毛豆)，有些植物则以消极的方式回应(如菽麻和豆薯)。III型分泌系统是一个 复杂的蛋白转运体系，革兰氏阴性细菌利用该系统转运效应蛋白进入真核寄主细 胞。由根瘤菌分泌出来的III型效应因子在宿主特异性结瘤方面起重要作用。结瘤 子。在体外试验中这些蛋白能被植物蛋白激酶磷酸化。然而它们在植物中的分子 功能仍然不清楚。在本论文中，在大肠杆菌中表达TnopP基因。6个组氨酸标记 的重组NopP蛋白通过亲和层析被纯化并被用来免疫兔子。制备好的抗NopPffll清 既能识别来自大肠杆菌的重宝f]．NopP蛋白，也能识别来自根瘤菌NGR234_L清培养 基中的经类黄酮诱导表达的天然NopV蛋fl。为了研究NopP在豆科植物和根瘤菌 共生过程中的作用，构建了根瘤菌NGR234中的NopP突变体并且对宿主植物进行 了结瘤实验。实验结果显示，NopPflCJ突变导致非洲山毛豆和菜豆(玉豆一号) 的根瘤数目减少。带有nopL和lnopP基因缺失的双突变体在非洲山毛豆上诱导产 生更少的根瘤，然而在菜豆(玉豆一号)上却观察到更多的结瘤。除此之外，构 以鉴定对于NopP功能必须的氨基酸。初步结果表明，NopP的这两个氨基酸的突 变轻微地，然而不是显著地减少了根瘤菌NGR234在菜豆(玉豆一号)上的根瘤 数目。为了开始NopP磷酸化位点的研究工作，N端带有6个组氨酸标签序列的 n-J在酿酒酵母W303aqb成功地表达，然而表达水平 表达体系。重组蛋EIHis-NopP 相对较低。将来的实验须对表达条件进行优化以得到足够多的磷酸化的NopP蛋 白。 酸化，非洲山毛豆，菜豆(玉豆一号)，结瘤，酿酒酵母W303a Ⅱ Functionalof 3effectorof Rhizobium analysisNopP,atype sp． strainNGl也34 Jin Name：Cheng Major：Botany Staehelin Supervisor：Christian ABSTRACT Rhizobium NGR234establishesa nodule with sp．strain nitrogen-fixingsymbiosis host ofthisstrainreactto secretedthe manylegumes．Someplants proteins by type three a or secretion system(T3SS)inpositive(Flemingiacongesta，TephrosiavogeliO T3SSsare negative(Crotalariajuncea，Pachyrhizustuberosus)manneLcomplex th