玉米铁氧还蛋白氧还蛋白系统相关蛋白表达及功能分析.pdf

摘要 植物叶绿体光合作用的氧化还原信号主要的系统是铁硫氧还蛋白系统，包括硫氧 研究了重组玉米Trx、FTR和Fd的性质。获得如下主要结果： 的还原胰岛素二硫键的能力，而突变体蛋白几乎没有还原能力。用Cys残基专一性标 记化合物AMS标记Trx，显示野生型Trx有氧化还原态，而突变体蛋白仅有还原态。 具有多样性。 其中可变亚基除去N端20个氨基酸残基，在大肠杆菌中表达和纯化了两个蛋白亚基， 残基后，可变亚基FTRA稳定性增加。 还蛋白SDS．PAGE显示纯化的蛋白为一条主带，蛋白呈现棕红色，紫外可见光谱扫描， am，415 在315 am和459am显示明显的吸收峰。电子顺磁共振波谱(EPR)分析表明 蛋白含有[2Fe．2s]+。固定化的Fd从玉米幼叶靶蛋白吸附多种与其作用的靶蛋白。 综上所述，借助大肠杆菌表达系统，本研究获得了重组玉米铁硫氧还蛋白系统3 个蛋白及部分蛋白突变体，并分析了功能，纯化的蛋白用于研究玉米及其它禾本科作 物中铁硫氧还蛋白系统对靶蛋白的活性调节，含有组氨酸标签的蛋白及突变体还用于 从玉米幼叶中筛选与铁硫氧还蛋白系统作用的靶蛋白。 关键词：铁硫氧还蛋白系统，玉米，重组表达，功能 Abstract aretworedox in ofthe There signals of systemsphotosynthesisplantChloroplast，One are ferredoxin／thioredoxinis ofthree majorsystems system，whichcomposedproteins， thioredoxin(Trx)，ferredoxin：thioredoxin far, reductase(FTR)andferredoxin(Fd)．So thaliana ferredoxin／thioredoxinhasbeen arabidopsis analyzed．In only system functionally the this functionofthreerecombinantfromEscherchiacoli． analyzed study,we proteins areas Themainresultsfollows： 1．The thioredoxins valuesof4．6forTb【-mand5．9forTlx一￡ purified displayedpI 111emodificationofthe the AMSrevealedthatthe proteinsby specificcystinereagent wild thioredoxinstheredox themutatedthioredoxins purifiedtype displayed states，but showedthereduced thatthereisnodisulfidebondinthemutated state，suggesting thioredoxins． 2．Thereduction