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用于大豆膳食纤改性的里氏木霉工程菌的构建
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目录 Y1787271
目 录
中文摘要…………………………………………………………………………………………．V
英文摘要…………………………………………………………………………………………VII
l弓I言……………………………………………………………………………………………………………………………l
1．1本研究的目的和意义………………………………………………………………………l
1．2文献综述…………………………………………………………………………………一2
1．2．1大豆膳食纤维…………………………………………………………………………．2
▲- 1．2．2大豆膳食纤维改性酶制剂……………………………………………………………．3
1．2．3食品级酶制剂表达系统………………………………………………………………．4
1．2．4丝状真菌遗传转化系统………………………………………………………………6
1．2．5农杆菌介导的丝状真菌的转化系统…………………………………………………。10
1．3本论文的主要研究内容…………………………………………………………………．．13
2材料与方法……………………………………………………………………………………．14
2．1试验材料…………………………………………………………………………………．14
2．1．1菌种及载体……………………………………………………………………………14
2．1．2试剂及酶类…………………………………………………………………………。14
2．1．3常用试剂的配制……………………………………………………………………．．14
2．1．4培养基………………………………………………………………………………．．15
2．1．5仪器……………………………………………………………………………………………………………．．16
2．2试验方法…………………………………………………………………………………16
2．2．1里氏木霉QM9414菌株的培养和菌种保存…………………………………………16
2．2．2里氏木霉DNA的提取………………………………………………………………16
2．2．3基因的克隆……………………………………………………………………………17
2．2．4敲除载体的构建………………………………………………………………………2l
2．2．5农杆菌感受态的制备和转化…………………………………………………………21
2．2．6农杆菌的处理和培养…………………………………………………………………2l
2．2．7农杆菌介导的里氏木霉的转化………………………………………………………22
2．2．8转化子PCR的鉴定…………………………………………………………………．．22
2．2．9转化子表型的鉴定……………………………………………………………………23
3结果与分析……………………………………………………………………………………24
3．1农杆菌介导的里氏木霉遗传转化体系的建立和优化……………………………………24
3．1．1五氟乳氰酸(5．FOA)筛选浓度的测定………………………………
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