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有机磷农药诱导后家蚕脂肪体特征蛋白及其基因的表达分析 中文摘要 有机磷农药诱导后家蚕脂肪体特征蛋白 及其基因的表达分析 中文摘要 近年来，随着人类基因组计划的顺利进行和完成，生命科学的研究进入了后基因 组时代。在这一时代，生命科学的主要研究对象已经从基因组学研究逐渐向功能基因 组学、蛋白质组学和细胞代谢组学等研究转移。蛋白质组学分析技术已被广泛应用于 生物创新研究，成为功能基因组学中最重要的核心技术之一。蛋白质组学是一门在整 个细胞水平甚至整体水平上研究各种蛋白质的性能，如表达水平、翻译后修饰等，以 便在蛋白质水平上获得一个细胞和调控网络的总体的生理生化进程。蛋白质组学技术 也适用于同时进行数百甚至数千种蛋白质的分析。随着有机磷杀虫剂在农作物和人类 mori)是 生活害虫防治中的广泛应用，导致大量害虫产生了抗药性。家蚕(Bombyx 鳞翅目昆虫的模式生物，由于家蚕与鳞翅目害虫在生理生化及农药代谢机制方面具有 相似性，对家蚕进行有机磷农药抗性的研究，将为鳞翅目害虫的防治和家蚕抗性品种 的选育提供一定的理论依据。本文以家蚕品种大造为研究材料，测定了有机磷农药辛 硫磷对5龄3d雌雄家蚕的毒力，通过比较家蚕在有机磷农药诱导和未诱导情况下脂 肪体蛋白质的表达谱，获得家蚕脂肪体与辛硫磷抗性相关蛋白，结合质谱分析技术， 鉴定差异表达蛋白，继而采用半定量RT-PCR方法研究该蛋白的基因转录水平。获得 的主要结果如下： l辛硫磷对大造品种5龄3d雌雄家蚕的致死中量测定 d家蚕，分别测定雌雄 用不同浓度梯度的辛硫磷药液处理雌雄分开饲养的5龄3 家蚕的辛硫磷致死中量，结果表明，雌性家蚕LCso为3．932-4．184ug／mL，雄性家蚕 LC50为3．989-4．219ug／mL，雄性家蚕的抗性略高于雌性家蚕。为之后的取材工作提 供了一定的理论依据。 2雄性家蚕在有机磷农药诱导下脂肪体蛋白的表达谱研究 2．15龄3 d雄蚕在有机磷农药诱导后脂肪体双向电泳图谱的建立 中文摘要 有机磷农药诱导后家蚕脂肪体特征蛋白及其基因的表达分析 d雄蚕脂肪体的蛋 采用蛋白质双向电泳技术对有机磷农药辛硫磷诱导后的5龄3 白质组分进行比较分析。结果表明，对照组共检测到465个蛋白点，诱导实验组检测 到396个蛋白点，其中能匹配的蛋白点有348对，匹配率为73．54％，蛋白点主要分 66．4 布在分子质量20．r kD、等电点5～8的范围内。 2．25龄3d雄蚕在有机磷农药诱导下脂肪体差异蛋白的质谱鉴定 将分析所得到的差异表达蛋白进行了基质辅助质量飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析，已鉴定的蛋白包括家蚕磷酸丝氨酸转氨酶(SerB)和家蚕甲硫腺苷磷酸化酶 (MTAP)。这2个蛋白分别涉及不同的代谢途径，如丝氨酸生物合成途径、丝氨酸代 谢途径、糖酵解途径、糖原异生途径、核苷酸代谢途径等。 2．3辛硫磷诱导后5龄3d雄蚕各组织中SerB基因的转录活性 采用半定量RT-PCR方法检测辛硫磷诱导后5龄3d雄蚕幼虫脂肪体等6种组织 器官中培基因的mRNA转录水平。经辛硫磷诱导后，在脑、中肠、丝腺、脂肪体、 精巢、马氏管组织器官中，墙基因mRNA的相对表达量分别比对照组上调183％、 的表达上调一致。 3雌性家蚕在有机磷农药诱导下脂肪体蛋白的表达谱研究 3．15龄3d雌蚕在有机磷农药诱导后脂肪体双向电泳图谱的建立 d雌蚕脂肪体的蛋 采用蛋白质双向电泳技术对有机磷农药辛硫磷诱导后的5龄3 白质组分进行比较分析。结果表明，对照组共检测到516个蛋白点，诱导实验组检测 到457个蛋白点，其中能匹配的蛋白点有409对，匹配率为70．25％，蛋白点主要分