家蚕内皮单核细激活多肽ⅱ基因的克隆与原核表达.pdf

摘要 内皮．单核细胞激活多肽II(edotllelial II，励私尸 monocyteactivatingpolypeptide 口)是由前体物质proEM尸口分解而成的，能够改变内皮和单核细胞的功能，具有 促进细胞凋亡和抑制肿瘤血管生成的特性，目前点蚴尸口主要被用于肿瘤治疗的实 验研究。为了获得大量有活性的E心尸口，本研究开展了对砌E川尸刀基因的克 隆、转录水平差异及重组表达的研究。 本实验根据已公布的家蚕基因组精细图谱和EST等公共数据库的序列信息，我 该基因ORF编码289个氨基酸，预测蛋白分子量约为32kDa，理论等电点为8．31； 该蛋白属于亲水性蛋白，没有明显的跨膜结构域，无明显的信号肽，且亚细胞定位在 线粒体或胞外的可能性很小，最有可能位于其它部位。邻接法构建的进化树显示家蚕 与二化螟亲缘关系最近，与哺乳动物人和小鼠的距离较远。 提取家蚕不同时期和不同组织的总I埘A，以M．MLV反转录第一链cDNA，以家 蛹期的体壁、出蛾当天的翅膀中不表达，在其它的组织中都表达，这说明家蚕内皮单 核细胞激活多肽II基因在不同时期和不同组织中的表达是有差异的。 迹检测确认B聊励私尸刀在E∞Zf 行了不同浓度的诱导表达，经SDS．PAGE电泳和w|estem blot检测，表明被诱导的目 的蛋白均得到了稳定的表达，这为以后对占聊三MP口蛋白的真核表达及其功能的进 一步研究奠定了基础。 关键词： 家蚕，内皮单核细胞激活多肽II，克隆，生物信息学分析，半定量PCR，原核表达 Abstract EdotlleliaJ aLsan monocyteactiVatiI培polypeptideII(上n纠尸∞waSdecomposed endomeliaJ柚d 6．0m onits induce II，baSedabilit)，to monocyte．activatingpolypeptideproEMAP chemotacticof inendotllelialcellsaIld aJldtoevoke tissuef-actor monocytes mi铲ation blood a11d IIhaS usedin tumors monocytes．EMAPbeen诹delytraeting leukocytes VaSculatureinViVoand becauseitw2LsidentifiedaSa11 tumor experiment anti-aJl西ogellic and could orderto more EMAPcloned apopotosis．111produceactiVity II，we promote EMAPII anddiscussthe expressed fom最^勿厂f，usingprokaryoticexpressions