新型筛选标记基alad和报告基因coba转化植物的研究.pdf

摘要 高等植物四吡咯分子包括：叶绿素、血红素和西罗血红素等，它们对植物光合作 用系统的正常运转和植物基因功能的研究有重要意义。本研究探讨其中叶绿素和西罗 acid III III)。本研究将ALAD 编码的基因口肠d和UPMT编码基因cD拗分别作为筛选标记基因和报告基因，并构建 表达载体用于植物转化研究。获得以下主要结果： 1．本研究将不同物种ALAD的N端插入His tag，经Ni．NTA介质一步纯化获得高纯 度蛋白。还探明了三种物种ALAD对抑制剂SA的耐受性，与枯草杆菌和浑球红细 合于叶绿体内表达。 2．研究了重组大麦UPMT的功能，大肠杆菌中过表达显示强烈的红色荧光。经紫外 可见和荧光扫描度确定荧光物质为三甲基咕啉和西罗叶绿三酸。 ALAD作为选择标记可增强报告蛋白UPMT的荧光强度。 4．构建了含选择标记基因牛口励d和报告基因大麦∞驰的植物表达载体，烟草瞬时转 化发现叶绿体的荧光量有一定的增强。 5．将含双标记基因的转化载体分别转化双子叶拟南芥C01．o和单子叶水稻日本晴， 实验初步获得转基因植株。同时，探明了筛选试剂对拟南芥的毒性作用，IlM级别即 可抑制根发育。说明SA筛选的灵敏度高。另外，初步结果表明，拟南芥T1代经土 培后，与野生型相比植株变高，叶片变大。而水稻转化体的生长受到抑制。 关键词：6．氨基酮戊酸脱水酶，选择标记基因，尿卟啉原III甲基转移酶，报告基因， 琥珀酰丙酮SA，亚细胞定位 Abstract The moleculesin roleintheno皿al te咖yrrole hi曲erplantplayeimportaIlt operation ofplantphotosyIlmesissystem， haemand etc． includingchlorophylls， siroheme， 6一锄inolaeⅥllinicacid III dehydrataSe(ALAD)aIlduroporl)h妒nogen (UPMT)are锕o inme of keyeIlzyIIlesups骶锄biosyIltllesisp砒way tetrapy玎oles． ALAD t11e condensationof“vom01eculesofALAtofom catalyZes the asymmetric tlle of aIld monopyn．ole，prophobilinogell heme， (PBG)， prec眦sor chlorophylls， IIIisthe substrateofUPMTaIld 砒a1锄ins．Uropoq)hyrinogen