新月弯孢霉漆酶产菌株选育及漆酶纯化研究.pdf

摘要 摘要 为提高新月弯孢霉分泌漆酶的产量和活性，本文利用物理诱变法(紫外．60Co吖复合 诱变，微波诱变)和化学诱变法(硫酸二乙酯诱变)对新月弯孢霉菌株进行诱变。在紫 外．60Co吖的作用下，新月弯孢霉分泌漆酶的活性由原始的O．55U／ml提高到1．668 U／，ml。在微波作用下，新月弯孢霉分泌漆酶活性由1．668U／fml提高到1．914U／ml。在硫 酸二乙酯作用下，新月弯孢霉分泌漆酶活性由1．914U／ml提高到1．949U／ml。最终酶活 比原始酶活提高了近3．544倍。新月弯孢霉菌株致死率和正突变率变化有一定相关性， 致死率在80％到90％时，正突变率最高。 通过以上诱变，得到高产漆酶菌株VC．W-L3，在此基础上进一步研究了新月弯孢 霉VC．W二”产漆酶的发酵条件，培养基成分。通过单因素实验、正交实验得到新月弯 ml 孢霉产漆酶的最适工艺条件为：发酵温度30℃，发酵时间72 6，250 h，培养基pH 三角瓶装液量120ml，摇床转速160r／min。最佳培养基配比为：土豆200 g／L，蔗糖30 5 mmol／L，吐温80O．1 g／L，大豆蛋白胨5g／L，KH2P04g／L，愈创木酚O．2 ml／L，M92+ 0．5mmol／L，Cu2+1mmol／L，Ca2+1mmol／L，Mn2+O．25mmol／L。其最高酶产量为2．306 U／ml，比培养基优化前的提高了18．32％。利用工业废料作为培养基主要成分，通过单 因素，正交试验得出最佳配比：废糖蜜30ml／L，豆粕15 5 g／L，KH2P04g／L，愈创木酚 0．2mmol／L，吐温800．1 mmol／L，CuZ+lmlllO儿，C∥+lmmol／L，Mn2+ ml／L，M92+0．5 O．25 U／ml。 mmo儿。最佳产酶量为1．485 kDa。 算得出纯酶的分子量为86．3 间，漆酶活性较高；在pH为5．5--,6．5的范围内稳定性最好，lh内平均剩余酶活在87％以 上。新月弯孢霉纯化后的漆酶的最适反温度为30℃，在20～30℃之间，漆酶热稳定较 好。纯化后的漆酶催化ABTS的米氏常数为0．064L／lomm_漆化纯：明表果结色脱料染。 酶在24h内对孔雀绿的脱色效果最好，其次为茜红素，中性红，刚果红，亚甲基蓝，最 后为甲基橙。在最初12h对孔雀绿的脱色效果最快。新月弯孢霉漆酶对混合染料有较好 的脱色效果，表明该菌在染料废水处理上具有较好的应用前景。 新月弯孢霉液体培养时产生的菌丝球对多种染料的脱色能力，多种染料在24h[勾的 脱色率均达到80％以上，且菌丝球稳定性良好，可重复使用6次。 关键词新月弯孢霉；诱变；漆酶；纯化；酶学性质；菌丝球 Abstract 暑■詈皇霉毫田鼍! II,昌詈暑詈暑=暑昌皇皇昌暑昌昌置皇暑葛蕾詈詈詈詈詈詈詈詈詈詈詈置詈皇皇鲁量篁皇宣詈皇詈詈詈兰詈詈詈皇暑暑暑 Abstract mutated Inordertoincreaselaccase and ofCurvular级／unata。we