血红素加氧酶-活性变化对肿瘤细胞体外抗药性、体内生长影响的研究.pdf

血红素加氧酶．1活性变化对肿瘤细胞体外抗药性、体内生长影响的研究 摘要 血红素加氧酶．1活性变化对肿瘤细胞体外抗药性、 体内生长影响的研究 摘 要 肿瘤是危害人类健康的杀手之一。肿瘤外科学、肿瘤放射治疗学、肿瘤化学治疗学构 成了现代肿瘤治疗学的三大支柱。三种治疗手段各有特点，互为补充。但是很多恶性肿瘤 对手术后的放化疗具有抵抗能力。这也是困扰肿瘤治疗的难题之一。目前已发现多种蛋白 与肿瘤抗药性有关。HO．1就是近年发现的与肿瘤的抗药性相关的蛋白之一。 HO．1是血红素分解代谢的关键酶，它能催化血红素降解并释放出胆绿素、CO和Fe2+， 也是一种广泛存在的抗氧化防御酶和内源性抗凋亡蛋白，与临床上多种疾病(如：肿瘤、 动脉粥样硬化、高血压等)关系密切。 上世纪80年代以来的研究证实HO．1与多种肿瘤具有相关性，发现HO．1在多种实体 肿瘤组织中较正常组织表达上调【l】。但是，HO．1在不同肿瘤中所起的作用不同【2】，一方面 高表达的HO．1通过抗凋亡作用促进某些肿瘤快速增长，并有利于肿瘤的转移和增殖，如 肺癌、结肠癌、前列腺癌、口腔鳞状细胞癌、食管癌掣31，体内外研究还证实HO．1的抑 制剂锌原卟啉可增强肺癌、结肠癌、前列腺癌对化疗的敏感性，减慢肿瘤生长速度【4叫； 另一方面，H0．1表达增高却抑制某些肿瘤细胞的增殖，Hill等的研究发现HO．1表达的 上调可抑制乳腺癌细胞增殖【7】。由此可见，需要探讨HO．1在更多的肿瘤中所发挥的作用 及其作用机制，为制定新的临床肿瘤治疗方案提供实验依据。 目前国内外研究Ho-1与肿瘤关系主要是通过改变HO．1表达水平观察肿瘤细胞的特 性变化【l】，但HO．1活性变化对肿瘤细胞的影响研究较少，尤其HO．1表达或活性变化对 胃癌细胞的影响研究还未见报道；另外，从动物水平上研究H0．1表达水平与肿瘤发生、 发展关系的较少，研究者多是利用HO．1的诱导剂或抑制剂(多为卟啉化合物)处理小鼠， 观测HO．1表达对肿瘤生长的影响，但这些卟啉化合物本身具有毒性，且作用机制复杂， 所得实验数据还不能如实反映机体HO．1水平对肿瘤特性的影响，建立HO．1不同表达水 平的转基因小鼠模型可更深入准确研究HO．1表达水平对肿瘤进程的影响。为此我们开展 了以下几个方面的工作： 第一部分H0．1活性对胃腺癌细胞BGC823抗药性的影响胃癌是一种常见肿瘤，目 前关于HO．1与其相关性研究报道较少，本研究通过构建pcDNA3．1HO．1、 性变化，并对HO．1活性变化后胃腺癌细胞对化疗药物抗药性进行观察。结果显示转染质 BGC823细胞HO．1活性降低；转染后胃腺癌细胞BGC823抗顺铂能力发生了改变， l 血红素加氧酶．1活性变化对肿瘤细胞体外抗药性、体内生长影响的研究 摘要 学意义。结果表明降低胃腺癌细胞HO．1活性会影响顺铂化疗的效果。 化后的HO．1片断注入小鼠受精卵原核中，然后将注射后状态良好的受精卵移植到假孕母 发现FⅦ来源的转基因小鼠FVBHO．1F0代动物阳性率为3．8％，大大低于一般l肚30％ 的比例，也低于BDFlHO．1中显性负性突变体系的阳性率，因此推测HO．1活性变化对 髓区表达增高。由于红髓有大量的巨噬细胞、B淋巴细胞和浆细胞，因此推测HO．1在该 区域高表达可能会影响动物抗炎能力。 素瘤B16F10生长、转移的影响。本实验对肿瘤出现时间、生长速度、动物的致死率、肺 部转移灶数量进行统计研究。结果显示，机体中HO．1活性变化对接种的肿瘤细胞在体内 生长状况有很大影响。HO．1高表达371L从肿瘤生长速度、动物的致死率和肺部转移灶数 量都低于野生鼠。并且，皮下肿瘤HE染色显示，371L动物肿瘤组织中炎细胞较少浸润。 可见HO．1活性高的动物可以有效抵抗黑色素瘤B16F10的转移，抑制肿瘤细胞在体内的 生长速度，有助于机体的抗炎。 ‘ 综上所述，本研究通过体外实验改变胃腺癌细胞BGC823Ho-1表达与活性，发现该 细胞HO．1活性降低对于顺铂的抵抗能力会提高。同时通过转基因技术，成功建立BDFl 活性提高，有助于减少肿瘤生长、转移和炎性反应。本实验为研究HO．1活性变化对肿瘤 的作用并进一步制定肿瘤