贵州小型猪sl经典ⅰ类和ⅱ类基因克隆和生物信息学分析及pcr-ssp分型方法的建立.pdfVIP

摘要 猪的主要组织相容性复合体又称猪的白细胞抗原(swine 1eukocyteantigen)，它是 位于猪的7号染色体上的是一组紧密连锁、高度多态并且与疾病抵抗和经济性状相 关联的基因，它编码与免疫应答相关的一类细胞膜糖蛋白的基因簇，通常被分为 人类器官移植中人源器官缺乏的今天，人们不得不将目光转移到猪身上：猪被认为 是人类异种器官移植的理想供体动物，除其解剖组织学、器官形态大小和生理特征 等与人相似外，更重要的是SLA和人的HLA具有高度同源性。近20年来，世界 各国猪品种的SLA研究中已发现了大量等位基因，国际动物遗传学会(ISAG)建 立了SLA等位基因及单倍型的系统命名体系。贵州小型猪源产白贵州省，有着体 型小、性成熟早、遗传纯度高抗病力强等特性，是我国重要的宝贵种质资源。由于 SLA的研究工作相对于人和鼠的MHC的研究起步较晚，深度不足，我国虽有着宝 贵的小型猪物种资源，但在SLA研究领域落后于国外。因此，加快我国小型猪SLA 的相关研究，促进与HLA比较分析，对推动免疫应答、动物疫苗、异种移植等领 域的发展尤为重要。 为确定贵州小型猪封闭群体中SLA经典I类和经典II类基因座位上的等位基 因的分布和群体中存在的单倍型，本研究采用反转录、目的基因扩增、克隆、双向 测序的方法对22头基础群个体的7个SLA基因座位上的基因进行了cDNA全长序 列的克隆分析，并且将所得序列同国内外发现的基因序列进行了同源性进化分析， 获得如下研究结果： 1．在贵州小型猪封闭群中SLA．1基因座位上共发现了4条新的等位基因，将 1)。经过进化树 SLA．1木08 sLA．1串gz02(accession：JQ361649)聚在 等位基因组内， 2．在SLA．2基因座位上共发现了5条等位基因，其中中4条为新发现的等位 J0361655)则与SLA．2：．c02组有着较近的进化关系。 3．在SLA．3基因座位上共发现了4条等位基因，其中3条为新发现的等位基 因，将其命名为： 1656) 4．在SLA．DRA基因座位上共发现了2条等位基因，其中1条为新发现的等位 基因为 sLA．DRA木010103(Accession：EU432070．1)。分析发现， 有着较近的进化关系。 上共发现了4条等位基因，在SLA．DQBl基因座位上共发现了4条等位基因，这些 SLA-DQA木010l(Accession：DQ883218．1)， 1。 SLA-DQA幸gz0 II类单倍型(Hp一00．14)已经存在，另三个单倍型均为新发现的单倍型，将其分别 (SLA一1丰gz02， SLA·2书 SLA-3冰gz01， B术m)；Hp—gz00．01(SLA．DRA’‘=gz01， SLA—DRBl水gzol，SLA—DQA半0101，SLA．DQBl术0601)。 7．依据贵州小型猪群体中发现的等位基因的序列特征，我们设计了25条序列 特异性引物，对5头子代个体进行了PCR．SSP方法的分型。发现子代个体中存在 群体中的四种单倍型。 关键词：主要组织相容性复合体，猪白细胞抗原，贵州小型猪，PCR序列特异性弓 物 Abstract swine In MHCis called leukocyte porcine，meusually and been tothe included恤ee clusters(claSsII claSsIII)a11d m萄orgene