盐芥冷响应mina表达模式分析及tsa-mir396功能初探.pdf

一㈣ Dissertationforthe ofMaster Degree of miRNAsand Profiling ontsa-·miR396in preliminarystudy - salsuginea Candidate： Xuemei Xiong Supervisor： Prof．Yan Xiufeng Associate Supervisor： Prof．WangYang Academic for：Master DegreeApplied Cell Speciality： Biology Dateof0ralExamination：June 7，2014 University： Northeast ForestryUniversity 万方数据 摘要 摘要 microRNA(miRNA)是一类不编码蛋白质、长度约为20．24nt的内源单链RNA分 子，是广泛存在于动物、植物和微生物等多种有机体中的非蛋白质的基因表达调控因 子。植物miRNA的调控作用不仅涉及植物组织器官的生长发育、激素调节、免疫反应 等生物学过程，并且参与植物对多种生物和非生物胁迫(如营养胁迫、干旱胁迫、盐胁 迫、低温胁迫等)的响应。 盐芥(Thellungiella thaliana)亲缘 salsuginea)是与模式植物拟南芥(Arabidopsis 关系非常近的一种盐生模式植物。盐芥在受到冷胁迫后体内缺乏内生冰核因而具有抗寒 性，未经冷驯化的盐芥可以在．13℃的条件下生存，冷驯化后的盐芥能够在．18．5C的条 件下生存。本研究分析了盐芥受到冷胁迫后体内部分保守的miRNA表达量变化情况， 并对tsa．miR396的功能进行初探。 (1)利用实时荧光定量PCR方法检测的结果表明，盐芥受到4C冷胁迫处理0、 到冷胁迫后表达趋势是在5h时下调，8h时上调，12至24h时下调；tsa．miRl67abc、 到冷胁迫处理8 分别在2h及5h时上升，接着在8h时下降。 (2)由于IIliRNA的生物学功能主要取决于其靶基因的功能，因此我们利用在线靶 ofcDNA 到25个靶基因。然后利用5’RACE(rapidamplificationends)方法验证tsa— 5 切割位点分别在tsa．miR3967末端的第8个和第9个核苷酸之间、第10个和第11个 区。 续转化做准备，通过对过表达tsa—miR396的转基因盐芥进行耐冷性功能分析，以期为进 一步全面、深入的探索盐芥miRNA应答冷胁迫的分子机制提供基础资料。 关键词 盐芥：miRNA；冷胁迫；实时荧光定量PCR；tsa-miR396 万方数据 Abstract